[發明專利]可控性HIV?1基因組靶向編輯系統和其靶向載運系統

在審

• 申請號: 201710089568.9
• 申請日: 2017-02-20
• 公開（公告）號: CN106755100A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 李因傳
• 申請（專利權）人: 李因傳
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/867
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種可控性HIV-1基因組靶向編輯系統，其特征在于，包括表達可控的編輯酶，搭配多重導引RNA(gRNA)；

具體地，所述質粒系統對編輯酶的表達添加了控制元件，使編輯酶的表達或者由LTR啟動子和TAT蛋白調控表達，或者由內置哺乳動物源的強啟動子和HIV-1的R元件組成的嵌合啟動子控制其表達，或者由內置哺乳動物強啟動子和TetO組成的嵌合啟動子控制表達；其特征在于，所述編輯酶表達質粒包括如下質粒：p1、p2、p3、p7、p8、p10、p11和p13；所述gRNA表達質粒包括如下質粒：p4、p5、p9、p12、p14和p15。

所述多重gRNA指的是針對HIV-1基因組多個位點和/或CCR5的編碼框基因組序列設計的靶向序列。其特征在于，所述多重gRNA表達載體中含有序列表中Seq ID No.1-5的序列中的至少2種。所述gRNA表達質粒包括如下質粒：p4、p5、p9、p12、p14和p15。

所述編輯酶、gRNA共表達質粒包括如下質粒：p6-1、p6-2和p6-3；

所述p1的序列如序列表中Seq ID No.7所示，p5的序列如序列表中Seq ID No.20所示，

p6-1的序列如序列表中Seq ID No.8所示，p7的序列如序列表中Seq ID No.9所示，p6-3和p15的五重gRNA表達序列如Seq ID No.21所示。

2.根據權利要求1所述的可控性HIV-1基因組編輯系統，所述帶有5’-和3’-LTR的質粒系統能夠整合基因組，其對基因組的整合依賴于細胞內所感染的HIV-1活病毒。

3.一種用于輸送權利要求1-2任一所述編輯系統的靶向載運系統，其特征在于，所述脂質體主要由以下組分制備而成：

二硬脂酰磷脂酰膽堿DSPC：膽固醇：多肽-PEG-磷脂質量比＝20-70:10-30:0.0001-2；

或者，二棕櫚酰磷脂酰膽堿DPPC：二硬脂酰磷脂酰膽堿DSPC：1,2-二油酰基磷脂酰膽堿DOPC：膽固醇：多肽-PEG-磷脂的摩爾比＝5:1:0.5-3:0.5-2:0.0001-0.5。

4.根據權利要求1-3所述的載運系統，其特征在于，所述載運系統含有PEG化的靶向脂質體，PEG為雙功能性的，除了共價連接磷脂成分外，還共價偶聯了特異的靶向多肽；所述靶向多肽包括單靶點多肽和多靶點多肽中的任一種或幾種組合；所述單靶點多肽包括抗CD4多肽aCD4或aCD4scFV、抗CCR5多肽aCCR5、抗CXCR4多肽aCXCR4；所述多靶點多肽包括aCD4_CCR5、aCCR5_CD4、aCD4_CXCR4、aCXCR4_CD4、aCCR5_CXCR4、aCXCR4_CCR5；所述偶聯的PEG分子量范圍為200-10000，所述偶聯的磷脂為磷脂酰乙醇胺或者其衍生物中的一種或多種；

aCD4scFV的編碼序列為序列表中Seq ID No.18；

aCD4_CCR5的序列為序列表中Seq ID No.12，其中其氨基可以放到左側端或者右側端；

aCCR5_CD4的序列為序列表中Seq ID No.13；

aCCR5_CD4scFV的編碼序列為序列表中Seq ID No.19；

aCD4_CXCR4的序列為序列表中Seq ID No.16；

aCXCR4_CD4的序列為序列表中Seq ID No.17；

aCCR5_CXCR4的序列為序列表中Seq ID No.14；

aCXCR4_CCR5的序列為序列表中Seq ID No.15。

上述功能性多肽，還可以直接與PE等脂質分子共價偶聯，可直接添加整合入脂質體膜分子層中。

5.根據權利要求3和4所述的載運系統，其特征在于，PEG-磷脂分子上還可偶聯穿透肽，形成“穿透肽-PEG-磷脂”，該分子與靶向多肽-PEG-磷脂搭配使用；穿透肽-PEG-磷脂與其他靶向多肽-PEG-磷脂的摩爾比為0.0001-2:1。

6.根據權利要求3-5所述的載運系統，其特征在于，脂質體組分中還可添加透明質酸化的磷脂，與靶點多肽-PEG-磷脂和穿透肽-PEG-磷脂搭配使用，所述透明質酸化的磷脂與其他多肽-PEG-磷脂的摩爾比為0.00001-1：1。