[發(fā)明專利]熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710089443.6
• 申請(qǐng)日: 2017-02-20
• 公開（公告）號(hào): CN106868126B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳少鴻;肖晶晶;周文根;姜萍萍;李欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳美因醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686
• 代理公司: 北京金蓄專利代理有限公司 11544
• 代理人: 孫巍

一種熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括熒光定量PCR檢測(cè)部及結(jié)果處理評(píng)價(jià)部，其中結(jié)果處理評(píng)價(jià)部包括位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果處理系統(tǒng)及參考數(shù)據(jù)庫；通過熔解曲線峰型圖檢測(cè)已擴(kuò)增的位點(diǎn)，得到對(duì)應(yīng)位點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行結(jié)果處理，將各位點(diǎn)的風(fēng)險(xiǎn)積點(diǎn)統(tǒng)計(jì)后得出該待測(cè)基因的風(fēng)險(xiǎn)值，并對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)庫中的風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別，綜合得到基因風(fēng)險(xiǎn)及相關(guān)處理結(jié)果。本發(fā)明通過采用熒光定量PCR的多重檢測(cè)試劑盒，可對(duì)多種基因的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，基于科學(xué)準(zhǔn)確的結(jié)果參考數(shù)據(jù)庫，可以得到十分準(zhǔn)確并且個(gè)性化及強(qiáng)，可對(duì)檢測(cè)樣本給予個(gè)性化的結(jié)果及建議，已達(dá)到更加有效地基因檢測(cè)的目的，具有更加廣泛的使用及推廣價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及基因檢測(cè)評(píng)估系統(tǒng)，具體的說是一種熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

隨著科學(xué)研究的不斷發(fā)展，人類基因組計(jì)劃完成后，后基因組計(jì)劃的全面展開，以基因工程為主導(dǎo)的生物技術(shù)在體育運(yùn)動(dòng)問題領(lǐng)域的應(yīng)用得到廣泛的關(guān)注。目前運(yùn)用遺傳學(xué)的理論和方法進(jìn)行運(yùn)動(dòng)選材已經(jīng)有了初步進(jìn)展。常用的基因檢測(cè)方法有：直接測(cè)序(directsequencing，DS)、連接酶檢測(cè)反應(yīng)(ligase detection reaction，LDR)、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(restriction fragment length polymorphism，RFLP)、變性高效液相色譜分析(denaturing high performance liquid chromotography，DHPLC)、定量PCR，其中利用DNA分析儀直接測(cè)序是金標(biāo)準(zhǔn)，但是上述方法分別存在著成本高、準(zhǔn)確率低、操作繁瑣和重復(fù)性差等問題。實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)(Real-time Quantitative PCR DetectingSystem，qPCR)，也叫實(shí)時(shí)定量基因擴(kuò)增熒光檢測(cè)系統(tǒng)，熒光定量PCR(realtime PCR)檢測(cè)在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法，qPCR系統(tǒng)為三代的PCR檢測(cè)技術(shù)，qPCR具有檢測(cè)靈敏度高，檢測(cè)線性范圍寬，檢測(cè)精度和重復(fù)性好等突出優(yōu)勢(shì)，因此被公認(rèn)為當(dāng)今世界用于臨床的最先進(jìn)核酸分子診斷技術(shù)。因此該技術(shù)可以高效、準(zhǔn)確的用于運(yùn)動(dòng)基因檢測(cè)。

單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)是指在基因組上單個(gè)核苷酸的變異，包括轉(zhuǎn)換、顛換、缺失和插入，形成的遺傳標(biāo)記，其數(shù)量很多，多態(tài)性豐富。SNP為第三代遺傳標(biāo)志，人體許多表型差異、對(duì)藥物或疾病的易感性等等都可能與SNP有關(guān)，SNP研究是人類基因組計(jì)劃走向應(yīng)用的重要步驟。這主要是因?yàn)镾NP將提供一個(gè)強(qiáng)有力的工具，用于高危群體的發(fā)現(xiàn)、疾病相關(guān)基因的鑒定、藥物的設(shè)計(jì)和測(cè)試以及生物學(xué)的基礎(chǔ)研究等。SNP在基因組中分布相當(dāng)廣泛，研究表明在人類基因組中每300堿基對(duì)就出現(xiàn)一次。大量存在的SNP位點(diǎn)，使人們有機(jī)會(huì)發(fā)現(xiàn)與各種疾病，包括腫瘤相關(guān)的基因組突變；從實(shí)驗(yàn)操作來看，通過SNP發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)基因突變要比通過家系來得容易；有些SNP并不直接導(dǎo)致疾病基因的表達(dá)，但由于它與某些疾病基因相鄰，而成為重要的標(biāo)記。SNP在基礎(chǔ)研究中也發(fā)揮了巨大的作用，通過對(duì)Y染色體SNP的分析，使得在人類進(jìn)化、人類種群的演化和遷徙領(lǐng)域取得了一系列重要成果。SNP在人類基因組中廣泛存在，平均每500～1000個(gè)堿基對(duì)中就有1個(gè)，估計(jì)其總數(shù)可達(dá)300萬個(gè)甚至更多。

已有越來越多的文獻(xiàn)對(duì)熒光定量PCR技術(shù)從各方面的應(yīng)用角度進(jìn)行闡述，大部分文獻(xiàn)公開了多種單一片段通過熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的具體方式方法，但在發(fā)明人進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)SNP位點(diǎn)的過程中，發(fā)現(xiàn)單一片段的檢測(cè)不足以滿足檢測(cè)要求，對(duì)于具有兩個(gè)或多個(gè)SNP位點(diǎn)的綜合性檢測(cè)，需要重復(fù)檢測(cè)，步驟繁瑣且操作時(shí)間長(zhǎng)。