[發(fā)明專利]一種萊克多巴胺的檢測方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710086762.1
• 申請(qǐng)日: 2017-02-17
• 公開（公告）號(hào): CN106872683B
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黎杉珊;羅擎英;劉耀文;申光輝;張志清;吳賀君;陳安均;劉興艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/34
• 分類號(hào): C12Q1/34
• 代理公司: 荊門市首創(chuàng)專利事務(wù)所 42107
• 代理人: 王鋒

本發(fā)明屬于食品殘留物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種超低檢測限的萊克多巴胺的檢測方法，該方法利用羧基化多壁碳納米管、殼聚糖和羧甲基化的β?環(huán)糊精等作為檢測探針原料，建立了葡萄糖濃度與萊克多巴胺含量之間的關(guān)系，獲得了可利用血糖儀快速且可重復(fù)性好的檢測萊克多巴胺的技術(shù)效果，同時(shí)該方法還具有低至0.001μg/L的檢測限，使得利用葡萄糖濃度測量萊克多巴胺含量的技術(shù)具有更強(qiáng)的實(shí)用性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品殘留物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種萊克多巴胺的檢測方法。

背景技術(shù)

萊克多巴胺是苯乙醇胺類β2-腎上腺素興奮劑，如果給動(dòng)物飼用含萊克多巴胺的飼料，會(huì)造成肌肉及組織中不同程度的殘留，通過食物鏈進(jìn)入人體，使消費(fèi)者出現(xiàn)不同程度的中毒現(xiàn)象。目前，我國已經(jīng)明確將其列為禁用藥品目錄。

目前，檢測萊克多巴胺的實(shí)驗(yàn)室確證技術(shù)是高效液相色譜(HPLC)或液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢出限為2μg/L左右，但是樣品前處理過程復(fù)雜，分析過程費(fèi)時(shí)、費(fèi)力。而酶聯(lián)免疫法具有檢測時(shí)間長的缺點(diǎn)。為此，開發(fā)一種方便快捷、檢測限低的萊克多巴胺檢測方法是十分緊迫的。

經(jīng)過本領(lǐng)域研究人員的不懈研究，近兩年開發(fā)出了一種利用血糖儀檢測萊克多巴胺含量的技術(shù)，然而，其探針的制備需要用到特殊的Envision試劑，成本較為高昂。另外，是否還可以獲得更好的檢測限，也是本領(lǐng)域人員非常感興趣的。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決本領(lǐng)域中的技術(shù)缺點(diǎn)和填補(bǔ)技術(shù)空白，本發(fā)明的目的在于提供一種萊克多巴胺的檢測方法所述方法包括：

(1)將羧基化多壁碳納米管溶于DMF溶液中并加入殼聚糖乙酸溶液中，超聲處理后，得到渾濁液，再加入羧甲基化的β-環(huán)糊精、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的PBS溶液，充分混合后，分散在含有牛血清蛋白的PBS溶液中；所述羧基化多壁碳納米管的長度為0.5～1.5μm；

(2)將萊克多巴胺抗體Ab加入到膠體金溶液中，再加入蔗糖酶溶液，充分?jǐn)嚢韬螅x心取沉淀并置于含有牛血清蛋白的PBS溶液中；

(3)將步驟(1)所得物加入到待測樣品中，室溫下充分混合，清洗后，加入步驟(2)所得物，室溫下充分混合，再加入蔗糖溶液，室溫下充分混合反應(yīng)，待反應(yīng)完畢，去除沉淀取上清液，測量葡萄糖含量；通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得待測樣品中萊克多巴胺的含量。

步驟(1)中，羧基化多壁碳納米管在DMF溶液的濃度為0.0020～0.0025g/ml；殼聚糖乙酸溶液中乙酸體積分?jǐn)?shù)為1％，殼聚糖的濃度為0.005～0.008g/ml，所述羧基化多壁碳納米管DMF溶液與所述殼聚糖乙酸溶液的體積比為1∶10～15。

步驟(1)中，羧甲基化的β-環(huán)糊精、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的質(zhì)量比為2∶1∶1。

步驟(1)或步驟(2)中，牛血清蛋白的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％。

步驟(2)中，所述萊克多巴胺抗體Ab的濃度為0.1mg/ml，其與膠體金溶液的體積比為1∶10。

步驟(3)中，將步驟(1)所得物加入到待測樣品中，室溫下充分混合，震蕩2h。

步驟(3)中，檢測葡萄糖含量時(shí)可以采用血糖儀。

所述PBS溶液的pH為7.2。

近些年來，在萊克多巴胺的快捷檢測領(lǐng)域一直未有十分明顯的突破，直到中國專利201410015040.3提供了一種快速檢測方法，其不但解決了常規(guī)檢測方法復(fù)雜且耗時(shí)的缺點(diǎn)，更具有十分優(yōu)秀的可重復(fù)性和檢測限。一般而言，HPLC對(duì)于萊克多巴胺的檢測限僅有2μg/L左右，而該專利的檢測限可低至0.02μg/L。