[發明專利]一種巖生忍冬成分鑒定及抗菌活性評價方法

在審

• 申請號: 201710086544.8
• 申請日: 2017-02-17
• 公開（公告）號: CN106706626A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 陳朝喜
• 申請（專利權）人: 西南民族大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N30/90;G01N1/34;G01N1/40
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司11246
• 代理人: 夏艷

技術領域

本發明屬于巖生忍冬成分鑒定技術領域，尤其涉及一種巖生忍冬成分鑒定及抗菌活性評價方法。

背景技術

巖生忍冬(Lonicera rupicola Hook.f.et Thomson)，又名西藏忍冬，為忍冬科忍冬屬植物，產于寧夏南部、甘肅臨潭、青海東南部、四川西部、云南西北部及西藏東部至西南部，長于海拔3.6km以上的高山或山坡灌木叢中。在中國，忍冬屬資源也較為豐富，尤以西南部種類最多。忍冬屬內有不少藥用植物和具有觀賞價值的綠化植物，據初步統計，屬內可藥用植物有49種，對許多致病菌有較強的抗菌作用。據現有資料表明，忍冬屬植物中的化學成分主要有四類：黃酮類、揮發油類、綠原酸類、苷類，此外還有甾醇類、糖類、無機元素類等。近年來，隨著合成及半合成抗菌素的增多和廣泛使用，臨床上細菌耐藥性問題日趨嚴重，面對這一嚴峻現狀，發揮中藥的治療優勢將成為重要課題。隨著抗菌素種類增多和廣泛使用，細菌耐藥性問題日趨嚴重，藥物的不良反應也不斷增加。由于化學合成藥物開發難度大，毒副作用明顯。學者們都在各種中草藥成分的抗菌活性方面展開了研究工作，期望從中草藥中得到更加理想的抗菌藥物。目前為止，忍冬屬植物中除金銀花、山銀花等在醫藥、食品等方面廣為應用而其藥理毒理作用得到深入研究外，其他忍冬屬的藥理毒理作用很少有研究報道。相關報道金銀花醇浸液對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎桿菌、腦膜炎雙球菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌、百日咳桿菌、綠膿桿菌、結核桿菌、霍亂桿菌等多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有一定的抑制作用。山銀花對白喉桿菌也有很強的抗菌作用，高劑量的山銀花能明顯減少金黃色葡萄球菌感染小鼠所致死亡率。目前，由于巖生忍冬生長條件的特殊性及其資源分布等因素，對巖生忍冬作為藥用植物研究尤其是對其活性成分和抗菌活性無明確報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種巖生忍冬成分鑒定及抗菌活性評價方法，旨在解決目前由于巖生忍冬生長條件的特殊性及其資源分布等因素，對巖生忍冬作為藥用植物研究尤其是對其活性成分和抗菌活性無明確報道的問題。

本發明是這樣實現的，一種巖生忍冬成分鑒定方法，所述巖生忍冬成分鑒定方法采用理化反應和薄層層析法鑒定巖生忍冬的化學成分，用紙片法和微量肉湯稀釋法檢測巖生忍冬石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水提取物的體外抑菌活性；

所述理化反應具體包括：稱取10g巖生忍冬粉末，浸泡于100mL蒸餾水中，密封浸泡24h，過濾，取其濾液；取若干滅菌試管，在試管中加入一定量巖生忍冬濾液，再分別加入各類一定量檢測試劑，觀察并記錄結果；

所述薄層層析法具體包括：取層析缸，以石油醚：乙酸乙酯＝1:10，v/v，為展開劑，在硅膠板上點樣后放入層析缸中，展開后在紫外燈365nm下觀察記錄有無熒光及熒光顏色，噴上顯色劑后再在紫外燈365nm下觀察熒光情況并記錄。

進一步，所述理化反應中試劑配制包括：

有機酸類顯色劑：

甲基紅試劑：稱取甲基紅100mg溶于100mL乙醇中即可；

溴甲酚綠指示劑：稱取溴甲酚綠0.04g溶于100mL乙醇中，用0.1mol/mL氫氧化鈉溶液調至藍色剛剛出現，移入棕色瓶中保存；

吖啶試劑：稱取吖啶5mg溶于100mL乙醇中即可；

酚和鞣質類顯色劑：

氯化鈉明膠試劑：稱取明膠1g溶于50mL水中，然后加10g氯化鈉使溶解，加水稀釋到100mL；

三氯化鐵試劑：5％三氯化鐵乙醇溶液加入少許鹽酸；

三萜、甾體類顯色劑：20％磷鉬酸乙醇試劑；

黃酮類顯色劑：2％醋酸鎂甲醇試劑；

苯丙素類顯色劑：5％氫氧化鈉甲醇溶液試劑；

醌類顯色劑：

無色亞甲基藍試劑：準確稱取100mg亞甲基藍溶于100mL乙醇中，加入1mL冰醋酸、1g鋅粉，攪拌至藍色消失，移入棕色瓶中，避光保存；

強心苷類顯色劑：

3，5-二硝基苯甲酸試劑：稱取3，5-二硝基苯甲酸1g，用50mL甲醇溶解，加入1mol/L氫氧化鈉溶液50mL，混合即可；

三氯乙酸試劑：稱取25g三氯乙酸溶于100mL乙醇中即可；

生物堿類顯色劑：

改良碘化鉍鉀試劑：稱取次硝酸鉍0.85g加入10mL冰醋酸和40mL水混合得溶液1；稱取碘化鉀8g加入20mL水溶液得溶液2；取溶液1和溶液2混合，取混合液1mL，加入2mL冰醋酸和10mL水混合即得試劑，移入棕色瓶中保存；