[發明專利]一種回收片段化降解DNA的方法有效

申請號：	201710086527.4	申請日：	2017-02-17
公開（公告）號：	CN106834274B	公開（公告）日：	2019-12-06
發明（設計）人：	魏冬凱;丁國徽;竇權	申請（專利權）人：	蘇州貝斯派生物科技有限公司
主分類號：	C12N15/10	分類號：	C12N15/10;C12Q1/6806
代理公司：	32256 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙)	代理人：	王鋒<國際申請>=<國際公布>=<進入國
地址：	215000 江蘇省蘇州市***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種回收片段降解 dna 方法
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【說明書】：

本發明公開了一種回收片段化降解DNA的方法。該方法包括：在降解DNA的溶液中加入羧基磁珠，使大片段DNA與羧基磁珠結合，而使小片段DNA保留于溶液中；將結合有大片段DNA的羧基磁珠與包含小片段DNA的溶液分離；使大片段DNA與羧基磁珠分離，再對大片段DNA進行片段化處理，直至形成小片段DNA；回收所述包含小片段DNA的溶液中的小片段DNA以及由大片段DNA經片段化處理形成的小片段DNA。本發明提供的回收片段化降解DNA方法大大提高了片段化降解DNA純化回收率，為該類樣本用于下游分子生物學研究提供了有效保障，且該方法所用試劑成分簡單，操作方便，成本低廉，不需特殊設備，并提高片段化降解DNA回收率。

技術領域

本發明涉及一種回收片段化降解DNA的方法，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

DNA是人類遺傳的物質基礎，為了弄清DNA在人類遺傳和發育過程中的功能和結構，DNA序列的檢測成為了研究DNA最重要的手段。隨著對DNA信息的海量需求，二代測序誕生了，該技術基于一項邊合成邊測序技術，代表公司有Roche(454)，Illumina(Solexa)，ABI(SOLID)。二代測序技術最基本的技術就是二代測序文庫的構建，文庫構建起始首先將待測樣本的基因組DNA進行破碎和片段化，主要手段有剪切力，超聲波，氮氣，酶切等。

影響DNA片段化最關鍵的因素在于基因組DNA的完整度，完整度高的DNA會獲得較好的效果。然而很多臨床樣本大多為石蠟包埋樣本，近年來也出現了很多穿刺及激光微切割樣本，這些樣本的DNA量少，降解程度高。使用常規DNA片段化及回收手段處理這類樣本時，往往因為降解DNA被片段化后，片段過小導致純化過程中大幅損失，因此降解DNA的片段化回收率低成為了科研人員對這類樣本研究中的瓶頸問題。如何提高降解DNA片段化回收率及盡可能保證DNA片段均一成為亟待解決的問題。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種回收片段化降解DNA方法，以克服現有技術中的不足。

為實現前述發明目的，本發明采用的技術方案包括：

本發明實施例提供一種回收片段化降解DNA的方法，其包括以下步驟：

在降解DNA的溶液中加入羧基磁珠，使大片段DNA與羧基磁珠結合，而使小片段DNA保留于溶液中，所述大片段DNA的尺寸大于2000bp，所述小片段DNA的尺寸為200bp～2000bp；

將結合有大片段DNA的羧基磁珠與包含小片段DNA的溶液分離；

使大片段DNA與羧基磁珠分離，再對大片段DNA進行片段化處理，直至形成小片段DNA；

回收所述包含小片段DNA的溶液中的小片段DNA以及由大片段DNA經片段化處理形成的小片段DNA。

在一些實施方案中，所述一種回收片段化降解DNA的方法包括以下步驟：

(1)取降解DNA溶于水，形成降解DNA溶液；

(2)向降解DNA溶液中加入羧基磁珠，混合均勻后，在室溫下孵育，使羧基磁珠與大片段DNA充分結合；

(3)利用磁場作用使羧基磁珠沉降，直至混合液澄清，再分離出羧基磁珠，并收集包含小片段DNA的澄清液；