[發(fā)明專利]耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的檢測(cè)方法及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710086182.2
• 申請(qǐng)日: 2017-02-17
• 公開（公告）號(hào): CN108467885A
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊金波;杜宇平;張斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海米絡(luò)凱生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12Q1/689;C12Q1/14
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

本發(fā)明涉及耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的檢測(cè)方法及試劑盒。本發(fā)明揭示了一種可特異性鑒定MRSA的試劑及試劑盒，其具有靈敏度高、特異性好、操作簡(jiǎn)單與快速明了的特點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物學(xué)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及臨床樣本中食源性致病菌——耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的檢測(cè)鑒定方法及檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

金黃色葡萄球菌是臨床上常見的毒性較強(qiáng)的細(xì)菌，在青霉素被廣泛使用后，有些金黃色葡萄球菌產(chǎn)生青霉素酶，能水解β-內(nèi)酰胺環(huán)，表現(xiàn)為對(duì)青霉素的耐藥。科學(xué)家研究出一種新的能耐青霉素酶的半合成青霉素，即甲氧西林(methicillin)，應(yīng)用于臨床后曾有效地控制了金黃色葡萄球菌產(chǎn)酶株的感染，可后續(xù)又發(fā)現(xiàn)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococoecus Aureus，MRSA)，MRSA從發(fā)現(xiàn)至今感染幾乎遍及全球，已成為院內(nèi)和社區(qū)感染的重要病原菌之一。

MRSA感染的治療是臨床十分棘手的難題之一，關(guān)鍵是其對(duì)許多抗生素有多重耐藥。因其耐藥機(jī)制是PBPs(青霉素結(jié)合蛋白)性質(zhì)的改變，因此，MRSA幾乎對(duì)所有的β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥，且在同時(shí)，還可能對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、氨基糖苷類抗生素等多種抗菌藥物表現(xiàn)出耐藥性。

目前，金黃色葡萄球菌的檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)是通過細(xì)菌的分離，增菌、分離培養(yǎng)、生化鑒定等一系列步驟來完成，靈敏度低，操作較繁瑣，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)。目前對(duì)于革蘭氏陽性細(xì)菌瓶的檢測(cè)方法為菌落的培養(yǎng)，當(dāng)菌落培養(yǎng)以后還需要18-48小時(shí)的時(shí)間確定該培養(yǎng)瓶中的菌。目前美國Cepheid公司研發(fā)的Xpert MRSA檢測(cè)試劑盒，應(yīng)用比較廣泛，其采用的是定量PCR的方法，但是其靈敏度還有待提高。

因此，本領(lǐng)域還需要研究?jī)?yōu)化的MRSA檢測(cè)試劑，來更為高效地檢測(cè)出MRSA。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的檢測(cè)方法，以及檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的方法特異性更強(qiáng)，檢測(cè)時(shí)間更短，因此更適合臨床使用，為MRSA感染診斷及其污染的快速檢測(cè)提供依據(jù)，可用于臨床感染診斷及食品衛(wèi)生監(jiān)管、商品檢驗(yàn)檢疫等。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種鑒定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法，所述方法包括：以待測(cè)樣品的DNA為模板，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物以及SEQ IDNO:3所示的探針進(jìn)行PCR檢測(cè)。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的待測(cè)樣品包括：體液、痰液、尿液、血液、唾液、食品、飼料、水產(chǎn)品或遺傳物質(zhì)材料。

在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述方法的檢測(cè)限是5.0×10³拷貝/ml。

在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述的PCR檢測(cè)是實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)。

在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述的方法為非診斷目的的方法。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種鑒定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的試劑盒，其中包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物，以及SEQ ID NO:3所示的探針。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述試劑盒中，所述的探針帶有熒光信號(hào)。

在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述的探針是Taqman探針。

在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括選自以下的一種或多種試劑：陰性質(zhì)控品、陽性質(zhì)控品、弱陽性質(zhì)控品、陽性定量參比品。

在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述試劑盒中還包括選自以下的一種或多種：DNA提取試劑，Taq酶，PCR緩沖液，DNA聚合酶，裂解液，蛋白酶K，說明鑒定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的方法的使用說明書。

在本發(fā)明的另一方面，提供前面任一所述的試劑盒的用途，用于從待測(cè)樣品中鑒定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌。