[發明專利]一種條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞及其制備方法

有效

• 申請號: 201710084499.2
• 申請日: 2017-02-16
• 公開（公告）號: CN106867969B
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發明（設計）人: 劉小青;陳光風;史秀娟;朱良
• 申請（專利權）人: 佰通生物技術(蘇州)有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/63
• 代理公司: 44268 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 王永文;劉文求

本發明公開一種條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞及其制備方法，包括步驟：A、利用DNA重組技術將細胞永生化基因插入第一克隆載體的克隆位點中并制成病毒顆粒；B、利用磁珠特異性選擇人外周血中的一種免疫細胞，再利用步驟A中所制得的病毒顆粒感染，得永生化免疫細胞；C、利用DNA重組技術將自殺基因插入第二克隆載體中，然后轉入所制得的永生化免疫細胞，即制得條件自殺性免疫細胞；D、利用DNA重組技術將單鏈抗體基因插入第三克隆載體的克隆位點中并制成病毒顆粒，再轉染條件自殺性免疫細胞，得條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞。解決了現有技術中腫瘤細胞靶向治療副作用大、無法廣泛臨床應用、體內存活時間短、成本較高、可控性差的問題。

技術領域

本發明涉及免疫細胞領域，尤其涉及一種條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞及其制備方法。

背景技術

免疫細胞對腫瘤細胞具有免疫監視和殺傷作用，尤其是攜帶有腫瘤特異性抗原遞呈的單鏈抗體（ScFV）的免疫細胞能高效特異性的識別、結合以及殺死相關的腫瘤細胞。比如，攜帶有腫瘤特異性抗原遞呈的單鏈抗體T淋巴細胞技術（CAR-T）在治療急性淋巴細胞白血病以及淋巴瘤中，腫瘤患者的緩解率高達80%以上。然而，傳統的CAR-T細胞技術具有潛在的細胞因子風暴等副作用，該副作用若不能有效控制，造成腫瘤患者死亡的概率在5-10%；另一方面，常規的CAR-T細胞技術需個性化制備每個患者的CAR-T細胞，更是限制了CAR-T技術不能真正廣泛臨床應用。而最近興起的帶有腫瘤特異性抗原遞呈的單鏈抗體NK細胞技術（CAR-NK），雖然細胞因子風暴的概率大大降低，但其在體內存活時間短，需要多次注射，這樣不僅大大提高治療成本，可控性也較差。

因此，現有技術還有待于改進和發展。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞及其制備方法，旨在解決現有技術中腫瘤細胞靶向治療副作用大、無法廣泛臨床應用、體內存活時間短、成本較高、可控性差的問題。

本發明的技術方案如下：

一種條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞的制備方法，其中，包括步驟：

A、利用DNA重組技術將細胞永生化基因插入第一克隆載體的克隆位點，并通過病毒包裝系統將第一克隆載體包裝成病毒顆粒；

B、利用磁珠富集法特異性選擇人外周血中的一種免疫細胞，然后利用含胎牛血清的DMEM培養基中進一步培養，得到擴大培養后的免疫細胞，再利用步驟A中所制得的病毒顆粒感染并進行傳代培養，即得永生化免疫細胞；

C、利用DNA重組技術將自殺基因插入第二克隆載體中，構建自殺基因的克隆載體，然后將所述自殺基因的克隆載體轉入所制得的永生化免疫細胞，即制得條件自殺性免疫細胞；

D、利用DNA重組技術將腫瘤抗原基因對應的單鏈抗體基因插入第三克隆載體的克隆位點，然后利用病毒包裝系統構建含有單鏈抗體基因的病毒顆粒，并利用所述含有單鏈抗體基因的病毒顆粒轉染條件自殺性免疫細胞，即得到條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞。

一種條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞的制備方法，其中，所述細胞永生化基因為SV40大T抗原永生化基因、端粒逆轉錄酶基因中的一種或多種。

一種條件自殺性抗腫瘤靶向免疫細胞的制備方法，其中，所述自殺基因為單純孢疹病毒胸腺嘧啶激酶基因、大腸桿菌胞嘧啶脫氨基酶基因、人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶基因中的一種或多種。