[發明專利]一種血紅蛋白的檢測方法及血紅蛋白檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201710082997.3
• 申請日: 2017-02-16
• 公開（公告）號: CN106872694A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 李昀地;周洪銳;楊延瑞;張梓琪;陳逸桐;宋兆瑞;李洲
• 申請（專利權）人: 天津中新科炬生物制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N33/559
• 分類號: G01N33/559;G01N33/72
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司12107
• 代理人: 李蕊

1.一種血紅蛋白的檢測方法，其特征在于：采用免疫夾心法進行檢測，具體步驟如下：標記有膠體金顆粒的第一抗體結合血液中釋放的血紅蛋白后，借助毛細作用力向前層析，層析至硝酸纖維素膜包被的第二抗體時，形成“膠體金顆粒-抗體-抗原-抗體”的復合體系，并且聚集于硝酸纖維素膜上，膠體金顆粒大量聚集時可形成紫紅色的信號，通過儀器能夠準確定量判讀檢測信號的強度，從而實現定量檢測,所述第一抗體為抗人血紅蛋白抗體，第二抗體為配對的血紅蛋白抗體，所述第一抗體和第二抗體可同時結合于目標抗原的不同表位，從而形成復合體系。

2.一種實現權利要求1所述檢測方法的血紅蛋白檢測試劑盒，其特征在于：包括由血紅蛋白檢測試紙、外置卡殼、樣本裂解液以及內設了相應標準曲線和判定方法的IC卡，其中，

所述血紅蛋白檢測試紙，寬度為3-5mm，長度為7-8cm，所述檢測試紙由含有膠體金標記的抗人血紅蛋白抗體的膠體金墊、包被有T線和C線的硝酸纖維素膜、樣品墊、吸樣墊和塑料底板組成，所述T線為配對的血紅蛋白抗體，C線為抗鼠IgG，所述抗人血紅蛋白抗體作為第一抗體標記有膠體金顆粒，樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜和吸樣墊從塑料底板一端依次排列至另一端；

所述外置卡殼，包含上蓋和下蓋，兩條所述血紅蛋白檢測試紙平行放置于所述下蓋內部，所述上蓋對應樣品墊部分設置有樣品孔，用于加入樣本和稀釋液，上蓋對應硝酸纖維素膜中部位置設置有視窗口，用于觀察硝酸纖維素膜上的C線、T線，判定結果；

所述樣本裂解液，主要配方為：0.02M Tris-HCL，0.15molNaCL，1％Triton100調節PH至7.4；

所述IC卡，為內置了標準曲線和判定方法的IC卡，該IC卡配套使用NS3001B型免疫層析結果判讀記錄儀使用，用于對檢測結果的定量判定，對血紅蛋白檢測范圍為50-250g/L。

3.根據權利要求2所述的血紅蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述吸樣墊為吸水濾紙。

4.根據權利要求2所述的血紅蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述包被有配對抗體的硝酸纖維素膜的制備方法為：以0.01M pH 7.4磷酸鹽緩沖液將配對的血紅蛋白抗體配制成終濃度1-2mg/mL，將噴膜儀在硝酸纖維素膜上以1.2-1.4ul/cm的參數進行劃線，包被T線，同時在硝酸纖維素膜上部包被1-2mg/ml的抗鼠IgG，作為C線，干燥，備用。

5.根據權利要求2所述的血紅蛋白檢測試劑盒，其特征在于：所述膠體金墊的制備方法為：取100ml膠體金液放在燒杯內，用0.2M K₂CO₃調至pH7.0-8.0，再加入1-2mg標記用血紅蛋白抗體，室溫攪拌1小時，封閉，12000rpm離心30分鐘，棄上清，用工作液復溶至60ml，然后用噴金機分別均勻地噴涂在無紡布或玻纖上，干燥備用。