[發(fā)明專利]一種蛹蟲草生產(chǎn)封閉連續(xù)定量接種方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710082888.1
• 申請日: 2017-02-16
• 公開（公告）號: CN106856982A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于春天
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林省天祺蛹蟲草繁育研究有限公司
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 吉林省長春市新時(shí)代專利商標(biāo)代理有限公司22204
• 代理人: 唐盼

1.一種蛹蟲草生產(chǎn)封閉連續(xù)定量接種方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

步驟（1）液體蛹蟲草菌種獲取：參照現(xiàn)有液體蛹蟲草菌種的制作方法在玻璃輸液瓶中進(jìn)行制作、培養(yǎng)；

步驟（2）蛹體封閉連續(xù)定量注射接種：在超凈工作臺下將步驟（1）中裝有液體蛹蟲草菌種的玻璃輸液瓶瓶口打開，用橡膠塞封口；然后將醫(yī)用一次性無菌輸液管一端插入橡膠塞上，另一端與獸醫(yī)用連續(xù)可調(diào)注射器密閉連接，使玻璃輸液瓶內(nèi)的液體蛹蟲草菌種通過無菌輸液管流到獸醫(yī)用連續(xù)可調(diào)注射器內(nèi)，最后通過調(diào)整注射器并將針頭扎進(jìn)蛹體內(nèi)來實(shí)現(xiàn)定量注射接種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛹蟲草生產(chǎn)封閉連續(xù)定量接種方法，其特征在于：所述液體蛹蟲草菌種獲取包括以下步驟：

（a）蛹蟲草斜面培養(yǎng)基制作：取去皮馬鈴薯200g，切成2cm×2cm×2cm方塊，加清水1000ml煮至熟而不爛程度，過濾，取上清液用之，加入葡萄糖20g、瓊脂18g，攪拌溶解后，加清水定容至1000ml,pH自然，121℃高壓滅菌30分鐘，分裝于Φ15×150試管中，每只試管分裝培養(yǎng)基15ml，擺成斜面待用；

（b）野生蛹蟲草菌種分離培養(yǎng)：野生蛹蟲草在長白山余脈采集所得；將野生蛹蟲草用75%酒精消毒處理，切成0.5cm×0.5cm小塊，接種到步驟（a）蛹蟲草斜面培養(yǎng)基試管中，在23℃條件下培養(yǎng)10天，得固體菌種，保存?zhèn)溆茫?/p>

（c）蛹蟲草液體培養(yǎng)基制作：取去皮馬鈴薯200g，切成2cm×2cm×2cm方塊，加清水1000ml煮至熟而不爛程度，過濾，取上清液用之，加入葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷酸二氫鉀0.5g，攪拌溶解后，加清水定容至1000ml,pH自然，分裝于500ml玻璃輸液瓶中，每瓶分裝300ml，瓶口用脫脂棉塞上，用牛皮紙封口，121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，晾至30℃以下進(jìn)行接種；

（d）液體蛹蟲草菌種制作：在步驟（c）裝有液體培養(yǎng)基的玻璃輸液瓶中接入步驟（b）培養(yǎng)的固體菌種，每瓶接入5mm×5mm菌塊4塊，在23℃條件下旋轉(zhuǎn)式搖床振蕩培養(yǎng)5-7天,菌絲充滿液體培養(yǎng)基后即可使用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種蛹蟲草生產(chǎn)封閉連續(xù)定量接種方法，其特征在于：步驟（d）所述振蕩培養(yǎng)參數(shù)為80-120r/min。