[發(fā)明專利]一種海帶雄配子體特異分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710082203.3
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN106834469B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張立楠;崔翠菊
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué);山東東方海洋科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明提供了一種海帶雄配子體特異標(biāo)記及其應(yīng)用，包括一條RNA片段及一條DNA片段為海帶雄配子體特異分子標(biāo)記，序列分別為SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2。本發(fā)明還提供從上述DNA片段設(shè)計(jì)的引物作為海帶雄配子體鑒定的性別特異性標(biāo)記，其上下游引物序列分別為SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4。本發(fā)明篩選到的性別鑒定標(biāo)記引物序列來自海帶基因編碼序列，針對性更強(qiáng)，效率更高，準(zhǔn)確度更高；性別鑒定過程更簡單快捷。本發(fā)明所示鑒定海帶配子體性別的方法，還可用于鑒定單性生殖的孤雌生殖孢子體，為推動海帶配子體的育種應(yīng)用研究以及海帶性別決定進(jìn)化系統(tǒng)的研究具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藻類分子遺傳育種領(lǐng)域，具體涉及一種海帶雄配子體特異分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

海帶(Saccharina japonica)是我國人工栽培歷史最長、產(chǎn)量最高、養(yǎng)殖面積最廣的大型經(jīng)濟(jì)海藻。海帶具典型的異型世代交替生活史，由大型的孢子體世代與微小的配子體世代相互交替而組成。孢子體個(gè)體大，是人工栽培和商品生產(chǎn)對象，占生活史時(shí)間長。配子體為微小絲狀體，是人工培育苗種的對象，在生活史中一般只存在兩個(gè)星期左右。

海帶配子體克隆技術(shù)在我國建立于二十世紀(jì)六、七十年代。通過海帶雌、雄配子體人工分離，同時(shí)給予一定的外部培養(yǎng)環(huán)境條件，配子體可以只進(jìn)行營養(yǎng)生長而不發(fā)育產(chǎn)精產(chǎn)卵，最終海帶配子體可形成無性繁殖系，并可在低溫、弱光下長期活體保存。配子體克隆的培育成功，使得在學(xué)術(shù)上短命的配子體在人工條件下轉(zhuǎn)化為長壽，實(shí)現(xiàn)配子體無限繁殖，因此，配子體克隆已經(jīng)成為海帶種質(zhì)資源保存和利用對象。同時(shí)，基于海帶配子體克隆技術(shù)建立的海帶配子體克隆育苗技術(shù)也在生產(chǎn)生得到大規(guī)模應(yīng)用，如海帶新品種“東方2號”的培育就是通過海帶配子體克隆育苗技術(shù)獲得的。目前，海帶配子體克隆在海帶保種、育種、育苗、生理及遺傳學(xué)研究中發(fā)揮著越來越重要的作用。

然而在實(shí)際的海帶配子體保種以及苗種培育過程中，通常會面臨雌雄配子體混淆的情況。如在海帶配子體保種過程中，需要對種質(zhì)庫中保存的海帶配子體克隆定期更換培養(yǎng)液，由于保存的海帶配子體呈現(xiàn)為絲狀或單細(xì)胞游離形式，在保存換水過程中常常導(dǎo)致不同性別的海帶配子體克隆混淆。因此，在進(jìn)行海帶配子體克隆育苗以及研究孤雌生殖等單性育種實(shí)驗(yàn)中，目前無法驗(yàn)證得到的孢子體是由通過單個(gè)配子體單性生殖得到的還是由雌、雄配子體雜交得到的。以上這些問題限制了海帶配子體在種質(zhì)保存、育苗以及相關(guān)遺傳學(xué)研究的應(yīng)用。

因此，鑒定海帶配子體性別及單性生殖海帶孢子體還需要一種針對性更強(qiáng)、篩選方法效率更高、鑒定效果更準(zhǔn)確的性別快速鑒定分子技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種海帶雄配子體特異分子標(biāo)記及其應(yīng)用，從而可以有效的鑒定海帶配子體性別，從而彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明首先提供一種海帶雄配子體特異性分子標(biāo)記，其核苷酸序列為SEQ ID NO:2；

本發(fā)明另一個(gè)方面提供一種檢測海帶配子體性別或單性生殖的孤雌生殖孢子體的制品，該制品能夠檢測上述的特異性片段；

所述的制品，為PCR擴(kuò)增引物對或分子探針；

作為實(shí)施例的一種具體記載，所述的擴(kuò)增引物對的上下游引物的序列信息如下

上游引物：5’-CGGAGATGCAGGTTCTAAGC-3’(SEQ ID NO:3)

下游引物：5’-CGCCACCCAAAAGGTTTAC-3’(SEQ ID NO:4)；

本發(fā)明再一個(gè)發(fā)明提供一種檢測海帶配子體性別的方法，是通過檢測上述的特異性片段來完成的；其步驟包括待檢測的海帶配子體基因組DNA的提取、PCR擴(kuò)增、擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳檢測。其特征為雄性個(gè)體中擴(kuò)增出一種大小為448bp的DNA片段，在雌性個(gè)體中無特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。