[發明專利]一種快速檢測牛奶中支原體的方法

在審

• 申請號: 201710081815.0
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN106893775A
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發明（設計）人: 李純錦;周虛;陳璐;趙云;饒家輝;王闖
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 合肥順超知識產權代理事務所(特殊普通合伙)34120
• 代理人: 陳波,鄭志強

1.一種快速檢測牛奶中支原體的方法，其特征在于，步驟如下：(1)從奶牛場采集牛奶樣，搖勻，取0.2ml放到1.5ml離心管中；(2)向奶樣中加入0.8ml DNA提取裂解液，充分混合，靜置5min，期間每間隔2min充分搖動一次；(3)繼續向奶樣中加入0.2ml脂肪分離液，充分搖勻，靜置2min；(4)靜置結束后，在10000r/min的轉速下離心2min；(5)離心結束后，將上清液移到離心柱中，蓋上蓋，10000r/min離心2min后，棄去回收管及里面液體，將離心柱放于1.5ml的離心管中，向離心柱中加100uL蒸餾水，10000r/min離心1min；(6)在反應管中加入12.5uL支原體檢測反應液，然后加入2uL步驟(5)處理后的奶樣，最后加入10.5uL蒸餾水，充分混合；(7)將反應管放于63℃水浴鍋中保溫50min；(8)保溫結束后，加入2uL支原體檢測顯色液，肉眼觀察或借助紫外燈觀察顏色變化，用肉眼觀察時，溶液為黃色說明牛奶中存在支原體，橙色說明沒有支原體；用紫外燈觀察時，溶液為亮黃色說明牛奶中存在支原體，暗棕色說明沒有支原體。

2.如權利要求1所述的快速檢測牛奶中支原體的方法，其特征在于，步驟(2)所述DNA提取裂解液的配制方法為：將57.3g鹽酸胍和50ml水飽和酚混合，加蒸餾水配成總體積為100ml，混合均勻。

3.如權利要求1所述的快速檢測牛奶中支原體的方法，其特征在于，步驟(3)所述脂肪分離液是氯仿。

4.如權利要求1所述的快速檢測牛奶中支原體的方法，其特征在于，步驟(6)所述支原體檢測反應液由以下物質組成：

其中，MgSO₄溶液中含有MgSO₄ 100mM，dNTP溶液中含dNTP10mM。

5.如權利要求1所述的快速檢測牛奶中支原體的方法，其特征在于，步驟(8)所述支原體檢測顯色液為SYBR Green。