[發明專利]一種標記植物花粉微絲微管細胞骨架的方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201710081736.X
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN108424876B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 李天忠;楊清;顧釗宇;李威;李洋;于杰;劉春生
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12Q1/02
• 代理公司: 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙) 11392
• 代理人: 張新利

1.用于標記植物花粉微絲微管細胞骨架的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括花粉固定液試劑A，花粉洗滌液試劑B，花粉微絲染料試劑組合C，以及花粉微管染料試劑組合D；

其中，所述試劑A由多聚甲醛、EGTA、PIPES、MgCl₂和蔗糖組成；所述試劑B由Tris-HCl、NaCl和蔗糖組成；所述試劑組合C包括0.1～0.15％NP-40、0.06～0.08％NP-40和Alex-561-phalloidin染色液；所述試劑組合D包括Cellulose和PectolyaseY-23混合液、0.1～0.15％NP-40、0.06～0.08％NP-40、甘氨酸溶液、一抗anti-a-Tubulin、二抗FITC-anti-mouse-IgG以及Tris-HCl、NaCl和甘氨酸的混合液；

所述植物為蘋果；

所述試劑A中多聚甲醛的質量體積比為5～6％、EGTA的濃度為2～3mM、PIPES的濃度為50～60mM、MgCl₂的濃度為2～3mM、蔗糖的質量體積比為10～15％；

所述試劑B中Tris-HCl的濃度為50～60mM，pH7.0，NaCl的濃度為200～250mM，蔗糖的質量體積比為10～15％；

所述試劑組合C中，0.1～0.15％NP-40用花粉萌發液配制；0.06～0.08％NP-40用TBSS配制；Alex-561-phalloidin染色液中Alex-561-phalloidin的濃度為150nM，pH7.0的Tris-HCl濃度為50～60mM，NaCl的濃度為200～250mM，蔗糖的質量體積比為10～15％；

其中，所述花粉萌發液的配方為：葡萄糖0.08～0.1g/ml、CaCl₂0.25～0.3mg/ml和硼酸0.08～0.1mg/ml；

所述TBSS由pH7.0 60mM的Tris-HCl，250mM NaCl和質量體積比為15％的蔗糖組成；

所述試劑組合D中，Cellulose和PectolyaseY-23混合液中Cellulose的濃度為1.0～1.5％，PectolyaseY-23的濃度為0.1～0.15％；0.1～0.15％和0.06～0.08％的NP-40用TBSS配制；甘氨酸溶液的濃度為50～60mM；一抗anti-a-Tubulin以及二抗FITC-anti-mouse-IgG的濃度配比分別為1:300-400；Tris-HCl、NaCl和甘氨酸的混合液中Tris-HCl的濃度為5～60mM，pH7.0，NaCl的濃度為200～250mM，甘氨酸的濃度為50～60mM；

其中，所述TBSS由pH7.0 60mM的Tris-HCl，250mM NaCl和質量體積比為15％的蔗糖組成。