[發明專利]一種長梗黃精組織培養與快速繁殖的方法

有效

• 申請號: 201710081087.3
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN106888968B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 孫駿威;趙進;周榮鑫
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王曉峰

1.一種長梗黃精組織培養與快速繁殖的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

1）長梗黃精花蕾的消毒和接種 于當年5月取尚未開花的長梗黃精的花蕾，放入冰箱4℃低溫冷藏0-48h，取出后加入適量的洗潔精溶液浸泡2min，用流水沖洗0.5-1.0h后，在超凈臺里將莖段轉入70%的酒精溶液中浸泡1min，用無菌水沖洗3次，浸入滴加有5滴吐溫-80，質量分數為0.1%的HgCl2溶液內浸泡消毒9-10min，然后用無菌水充分浸洗3次，得到消毒完的外植體材料；

2）叢生芽的誘導 將上一步得到的外植體材料放到無菌濾紙上，切去頭尾，去除雄蕊和雌蕊，將花瓣切成2cm2大小，接于添加TDZ0.5mg/L，NAA0.2mg/L，AC0.5-1.0mg/L的MS基本培養基中，該培養基中的蔗糖添加量為30g/L，瓊脂添加量為8.0g/L，pH為5.8-6.0，培養基曾于121℃下滅菌20min；接好花瓣的培養基置先于黑暗中培養3-5d，培養溫度為28±2℃；隨后轉入光照培養，培養條件為：培養溫度為28±2℃，光照時間為14h光/10h暗，光照強度30-40μmol/(m2?s)；

3）不定芽的增殖 將上一步誘導獲得的不定芽叢切成2-3個不定芽的芽塊，接種到添加有TDZ0.05mg/L，6-BA2.0mg/L，CH0.3-0.4g/L，AC0.5-1.0mg/L的MS基本培養基中進行培養，培養條件為：培養溫度為28±2℃，光照時間為14h光/10h暗，光照強度30-40μmol/(m2?s)；

4）再生植株的生根培養 切取葉片嫩綠、生長旺盛且葉片3-4枚的不定芽，插入添加有50%MS，6-BA0.2，NAA0.5mg/L，香蕉泥80-100g/L的MS基本培養基中生根，培養基中添加的蔗糖為20-30g/L，瓊脂添加量為8.0g/L，pH5.8-6.0，并曾于121℃下滅菌20min；

5）煉苗移栽 待生根的組培苗的苗高長至5cm以上，根長超過5cm時，松開組培瓶的瓶蓋，往瓶中注入少量無菌水以防止培養基干裂，于6h后半挪開瓶蓋，并添加無菌水，再過18h，移走瓶蓋，讓30-40μmol/(m2?s)光強的燈光直接照射再生植株培養2d，期間加無菌水若干次防止培養基干燥開裂；然后小心地將培養基搗碎，拿出再生植株，用流水小心將殘留的瓊脂沖洗干凈，將植株定植于曾消毒過的珍珠巖，菜園土重量比為1：100-200的混合基質中，澆透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆蓋以保溫保濕，室內溫度控制在24-28℃之間；3d后揭開聚乙烯塑料薄膜四角，次日將聚乙烯塑料薄膜全部揭開，待新葉展開后即可帶土移栽至大田。

2.根據權利要求1所述的一種長梗黃精組織培養與快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟1）中接種的材料為尚未開花的花蕾，并于冰箱4℃低溫冷藏12-24h。