[發(fā)明專利]一種鼠婦有效部位抗腫瘤的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710081085.4
• 申請(qǐng)日: 2017-02-15
• 公開（公告）號(hào): CN106727719A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周長征;劉文靜;楊穩(wěn);劉飛;王繼峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 周長征
• 主分類號(hào): A61K35/64
• 分類號(hào): A61K35/64;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥活性成分生產(chǎn)提取工藝，涉及鼠婦抗腫瘤有效部位提取的新思路新方法，具體涉及利用抗腫瘤追蹤的方式提取分離鼠婦有效成分。

背景技術(shù)

隨著對(duì)中藥抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)和臨床研究的深入開展，中藥抗腫瘤作用日益被肯定，也越來越受到國際社會(huì)的承認(rèn)，成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。

鼠婦俗稱潮濕蟲、地虱婆、潮蟲，分為平甲蟲科動(dòng)物平甲蟲或潮蟲科動(dòng)物鼠婦的干燥蟲體。

腫瘤細(xì)胞的代謝比正常細(xì)胞旺盛，腫瘤細(xì)胞是正常細(xì)胞在致瘤因素作用下，基因發(fā)生了改變，失去對(duì)其生長的正常調(diào)控，導(dǎo)致異常增生。

鼠婦具有破瘀利水、利咽止痛的功效，在扁平疣、口腔炎、鵝口瘡、牙痛、咽喉腫痛、術(shù)后疼痛、小便不利、閉經(jīng)等的臨床治療應(yīng)用非常廣泛，其鎮(zhèn)痛、抗炎作用效果尤為顯著。

鼠婦的乙醇提取物具有體外抗人肝癌細(xì)胞株（Bel-7402）、肺癌（A549）以及乳腺癌（MCF-7）的作用。發(fā)明內(nèi)容。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是明確了鼠婦提取物在體外對(duì)不同癌細(xì)胞的抑制效果。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是確定鼠婦對(duì)常見腫瘤的體外抑制作用及有效部位。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)鼠婦乙醇提取物經(jīng)氯仿萃取濃縮后所得的物質(zhì)對(duì)Bel-7420、A549、MCF-7均有顯著抑制作用，具體如下步驟：

（1）取一定量的鼠婦藥材用10倍的95%的乙醇加熱回流提取2次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)；

（2）合并兩次的提取液減壓濃縮，濃縮成浸膏；

（3）將所得浸膏用一定量水溶解，加入等量的氯仿萃取兩次合并濾液為氯仿萃取物a，再加入正丁醇萃取兩次合并濾液為正丁醇萃取物b，剩余的液體為c；

（4）將a、b、c三種溶液減壓濃縮至有極少溶劑后，進(jìn)行冷凍干燥，得A、B、C三種藥物粉末；

（5）用MTT法進(jìn)行體外腫腫瘤實(shí)驗(yàn)，把以上三種藥物配制成一系列濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)；

（6）所選用的癌細(xì)胞有Bel-7420、A549、MCF-7。

具體實(shí)施方式

實(shí)例1（1）稱取一定量鼠婦藥材用10倍的95%的乙醇加熱回流提取2次，第一次2小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，合并兩次提取液，減壓濃縮至浸膏，加水溶解后所得浸膏用100ml水溶解，加入等量的氯仿萃取兩次合并濾液為氯仿萃取物a，再加入正丁醇萃取兩次合并濾液為正丁醇萃取物b，剩余的液體為c。

（2）將（1）得到的a、b、c減壓抽濾，濃縮到含有極少溶劑時(shí)冷凍干燥得粉末A、B、C。

（3）將（2）配成400μg/ml、300μg/ml、200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml系列濃度。

（4）將凍存的細(xì)胞復(fù)蘇，待細(xì)胞貼壁長滿后進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

（5）細(xì)胞用胰酶消化后加入培養(yǎng)基104-105個(gè)/ml的細(xì)胞懸液,以每孔加于孔板中,細(xì)胞對(duì)照組孔再加入含小牛血清的培養(yǎng)液,陽性對(duì)照組加入100μg/ml的順鉑，實(shí)驗(yàn)組孔加入(3)中不同濃度提取物的實(shí)驗(yàn)用藥液。每組3個(gè)復(fù)孔。放入孵育箱中培養(yǎng)24h。用微量加樣器每孔加入20μlMTT培養(yǎng)4h,然后每孔加入100μlDMSO,震蕩6分鐘,使生成的甲囋顆粒完全溶解,在酶標(biāo)儀上選擇波長540nm為測定值。

（6）將癌細(xì)胞Bel-7420、A549、MCF-7分別進(jìn)行（4）、（5）操作得到A對(duì)這三種細(xì)胞均有抑制作用，且IC₅₀分別為82μg/ml、145μg/ml、100μg/ml。