[發明專利]一種嗜熱真菌角質酶及其編碼基因與應用有效
| 申請號: | 201710080156.9 | 申請日: | 2017-02-15 |
| 公開(公告)號: | CN108424894B | 公開(公告)日: | 2021-06-08 |
| 發明(設計)人: | 江正強;段曉杰;閆巧娟;劉瑜;楊紹青 | 申請(專利權)人: | 中國農業大學 |
| 主分類號: | C12N9/18 | 分類號: | C12N9/18;C12N15/55;C12N15/81;C12N1/19;C12P7/62;C12P7/64;A23L27/20;C12R1/84 |
| 代理公司: | 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙) 11392 | 代理人: | 董琪 |
| 地址: | 100193 *** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 真菌 角質 及其 編碼 基因 應用 | ||
1.一種蛋白質,是如下1)或2)所述的蛋白質:
1)序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質;
2)序列表中序列2自氨基末端第17至215位所示的氨基酸序列組成的蛋白質。
2.編碼權利要求1所述蛋白質的核酸分子。
3.如權利要求2所述的核酸分子,其特征在于:所述核酸分子為DNA分子或RNA分子;所述DNA為cDNA、基因組DNA或重組DNA;所述RNA為mRNA或hnRNA。
4.如權利要求3所述的核酸分子,其特征在于:所述DNA分子為如下1)所述的DNA分子:
1)序列表中序列1所示的核苷酸序列組成的DNA分子。
5.含有權利要求2或3或4所述核酸分子的表達盒。
6.含有權利要求2或3或4所述核酸分子的重組載體。
7.如權利要求6所述的重組載體,其特征在于:所述重組載體是在pPIC9K的多克隆位點插入序列表中序列1所示的核苷酸序列得到的重組質粒pPIC9K-McCut。
8.含有權利要求2或3或4所述核酸分子的重組菌。
9.如權利要求8所述的重組菌,其特征在于:所述重組菌通過將所述重組載體導入宿主微生物中得到。
10.權利要求1所述蛋白質的生產方法,其特征在于:所述方法是將權利要求8所述重組菌進行發酵培養,得到所述的蛋白質。
11.如權利要求10所述的蛋白質的生產方法,其特征在于:所述發酵培養依次經過如下步驟:
1)種子液培養:將重組菌接種到150mL BMGY培養基中,在30℃,200rpm條件下振蕩過夜培養至OD600為2-6,得到種子液;
2)基礎培養:將步驟1)的種子液接種于含有1.5L基本培養基BSM的5L發酵罐中培養,所述培養溫度為30℃,pH為4.0,轉速600rpm,待甘油消耗完全,進行甘油流加培養;
3)甘油流加培養:流加質量濃度為50%的甘油,溫度為30℃,pH為5.0,通過調整流加速度保持溶氧在20%-70%,流加時間4-6h;待菌體濕重達到180-220g/L,停止流加甘油;
4)甲醇誘導培養:停止流加甘油后,饑餓半小時,流加100%甲醇誘導,轉速800rpm,培養溫度為30℃,pH為6.0,溶氧20%-70%。
12.權利要求1所述蛋白質在水解黃油制備奶味香精和合成風味酯中的應用。
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