[發明專利]一種3-甲基喹噁啉-2-羧酸殘留的快速檢測試劑盒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710079789.8
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN108426996B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 張勛;孫成;倫麗麗;李奇富
• 申請（專利權）人: 江蘇美正生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/577
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 康瀟

本發明屬于熒光免疫分析技術領域，涉及一種3?甲基喹噁啉?2?羧酸殘留的快速檢測試劑盒及其制備方法和應用。該試劑盒包括檢測卡和熒光試劑微孔，檢測卡中的試紙條包括底板、樣品墊、層析膜和吸水墊，層析膜的基材上設置有用于包被3?甲基喹噁啉?2?羧酸?載體蛋白偶聯物的檢測區和用于包被羊抗鼠二抗的質控區；熒光試劑微孔包括3?甲基喹噁啉?2?羧酸單克隆抗體標記的時間分辨熒光微球和可密封容器。利用該試劑盒能夠在較短時間內檢測動物組織樣本中是否含有3?甲基喹噁啉?2?羧酸殘留，不需要昂貴設備，適于推廣。另外，檢測方法靈敏度高，檢測限可達0.2μg/kg，持平或高于ELISA法，而且檢測時間更短。

技術領域

本發明屬于熒光免疫分析技術領域，涉及一種用于快速檢測喹乙醇代謝物3-甲基喹噁啉-2-羧酸殘留的試劑盒，其制備方法，及其在檢測動物組織樣品中3-甲基喹噁啉-2-羧酸殘留中的應用。

背景技術

喹乙醇(又稱喹酰胺醇)，商品名為倍育諾、快育靈，CAS號為23696-28-8，分子式為C₁₂H₁₃N₃O₄，化學名為2-[N-(2-羥基)乙基]氨基甲酰基-3-甲基-喹噁啉-1,4-二氧化物，是一種飼料添加劑，雖然能夠提高飼料轉化率，促進牲畜生長，但對大多數動物具有明顯的致畸作用，對人也具有潛在的三致作用(致突變、致癌、致畸)。因此，喹乙醇在美國和歐盟都被禁止用作飼料添加劑，2005版《中國獸藥典》也明確規定：禁止將喹乙醇用于家禽及水產養殖。

喹乙醇在動物體內不穩定，短時間內即可產生十多種代謝物，3-甲基喹噁啉-2-羧酸(又稱3-甲基喹喔啉-2-羧酸，MQCA)則是其主要代謝產物之一。該化合物在體內相對穩定，是國際食品法典委員會(CAC)認定的標示殘留物之一。我國農業部第235號公告中規定：動物肌肉和肝臟組織中的最大殘留限量分別為4μg/kg和50μg/kg。

目前，針對動物組織樣品中MQCA殘留的檢測方法主要有儀器檢測方法和免疫學快速檢測方法。儀器檢測方法一般需要昂貴的儀器和專業的操作人員，目前的方法主要有農業部第1077號公告-5-2008水產品中喹乙醇代謝物殘留量的測定高效液相色譜法、GB/T20746-2006牛、豬的肝臟和肌肉中卡巴氧和喹乙醇及代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法等，最低檢測限為0.5μg/kg。免疫學快速檢測方法目前只有ELISA方法能達到0.2μg/kg的檢測限，而且仍然需要酶標儀等大型儀器，檢測操作時間長。同樣基于免疫學原理的膠體金檢測方法雖然具有操作方法簡便的優點，但其靈敏度比ELISA差，達不到檢測要求，因而目前尚未用于MQCA的檢測。

發明內容

針對現有技術中MQCA殘檢方法存在的儀器依賴度高、檢測限高、操作復雜、操作時間長等問題，本發明旨在提供一種MQCA殘留的快速檢測試劑盒及其制備方法和應用。本發明利用時間分辨熒光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay，TRFIA)技術替代膠體金標記方法，并結合免疫層析技術，成功開發出針對MQCA殘留的快速檢測試劑盒，可以簡便、快速地檢測動物組織樣品中的MQCA殘留，并且可以達到0.2μg/kg的檢測限。

具體而言，本發明采用如下技術方案：

一方面，本發明提供了一種MQCA殘留的快速檢測試劑盒，其包括檢測卡和熒光試劑微孔，其中：

所述檢測卡包括試紙條和用于容納所述試紙條的外殼，所述試紙條包括底板、樣品墊、層析膜和吸水墊，其中：

所述底板上依次固定有所述樣品墊、層析膜和吸水墊，所述樣品墊的始端與所述底板的始端對齊，所述樣品墊的末端與所述層析膜的始端相連，所述層析膜的末端與所述吸水墊的始端相連，所述吸水墊的末端與所述底板的末端對齊；