[發明專利]TEM1特異性熒光探針及其應用

有效

• 申請號: 201710078187.0
• 申請日: 2017-02-14
• 公開（公告）號: CN106729769B
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發明（設計）人: 秦宇;鮑會靜;徐晨
• 申請（專利權）人: 天津醫科大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;C09K11/06
• 代理公司: 北京柏杉松知識產權代理事務所(普通合伙) 11413
• 代理人: 劉繼富;王春偉

本發明提供了一種TEM1特異性熒光探針，其包括抗TEM1單鏈抗體、連接子MAL?PEG?NH₂和熒光染料ICG?NHS，其中，所述熒光染料ICG?NHS通過酰胺鍵與連接子MAL?PEG?NH₂連接，所述抗TEM1單鏈抗體的C末端為半胱氨酸，并通過硫醚鍵與連接子MAL?PEG?NH₂連接。本發明提供的TEM1特異性熒光探針特異性好，靈敏度高，無細胞毒性，由于抗TEM1單鏈抗體的分子量較小，其在血清中易于清除，并且免疫原性較小，在體內不易引發特異性反應；另外，本發明的TEM1特異性熒光探針還具有干擾小、穿透力強的優點，適于臨床應用。

技術領域

本發明涉及光學分子成像領域，具體涉及熒光探針領域，特別涉及一種TEM1特異性熒光探針及其應用。

背景技術

近年來，光學成像以其非侵襲性、實時、分辨率高等優勢廣泛應用于腫瘤研究領域，可對腫瘤進行早期診斷，反映腫瘤解剖學結構及代謝情況。吲哚氰綠(IndoCyanineGreen，ICG)是最常見的傳統的非特異性熒光探針，主要應用于臨床的視網膜血管造影和肝臟功能測定。但是，ICG可以與大部分的清蛋白非特異性的結合，因此極大的限制了其在臨床診斷中的作用。

卵巢癌是一種女性生殖系統惡性腫瘤，死亡率高居婦科癌癥首位，由于其發病隱蔽，臨床癥狀、體征不典型，目前缺乏有效的早期診斷方法。新近發現腫瘤組織中存在腫瘤內皮細胞標志物(TEM)，其在正常組織中少量表達或不表達，能夠成為良好的腫瘤標志物。研究證明內皮唾液酸蛋白(TEM1/endosialin/CD248)在卵巢癌組織中高表達，與體內其他器官差異明顯。

發明內容

本發明提供了一種TEM1特異性熒光探針，其包括抗TEM1單鏈抗體、連接子MAL-PEG-NH₂和熒光染料ICG-NHS，其中，所述熒光染料ICG-NHS通過酰胺鍵與連接子MAL-PEG-NH₂連接，所述抗TEM1單鏈抗體的C末端為半胱氨酸，并通過硫醚鍵與連接子MAL-PEG-NH₂連接。

在本發明一個優選的實施方案中，所述抗TEM1單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

在本發明另一個優選的實施方案中，所述抗TEM1單鏈抗體由SEQ ID NO.1所示的核酸序列編碼。

在本發明另一個優選的實施方案中，所述連接子MAL-PEG-NH₂中，PEG分子量為10K。

在本發明另一個優選的實施方案中，所述TEM1特異性熒光探針的親和系數為6-10nM，優選7-9nM。

本發明還提供了TEM1特異性熒光探針在制備診斷卵巢癌的試劑中的用途。

本發明還提供了一種組合物，其包含所述的TEM1特異性熒光探針和藥學上可接受的載體。

本發明還提供了一種試劑盒，其包含所述的TEM1特異性熒光探針。

本文所使用的術語“試劑盒”包括本發明的TEM1特異性熒光探針和使用說明書。該試劑盒能進一步包含至少一種另外的試劑。試劑盒通常包括一個標簽，簡要地說明了試劑盒內容的目的用途。

本發明提供的TEM1特異性熒光探針特異性好，靈敏度高，無細胞毒性，由于抗TEM1單鏈抗體的分子量較小，其在血清中易于清除，并且免疫原性較小，在體內不易引發特異性反應；另外，本發明的TEM1特異性熒光探針還具有干擾小、穿透力強的優點，適于臨床應用。

附圖說明

圖1為構建質粒的克隆驗證的結果；

圖2為各表達菌株超聲破碎后的SDS-PAGE結果；

圖3為不同批次復性的包涵體蛋白的SDS-PAGE結果；