[發明專利]赤皮青岡無菌外植體制備及初始芽誘導方法

在審

• 申請號: 201710077556.4
• 申請日: 2017-02-14
• 公開（公告）號: CN106888966A
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發明（設計）人: 唐春艷;陳素云
• 申請（專利權）人: 唐春艷;陳素云
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司45114
• 代理人: 蘭如康

1.一種赤皮青岡無菌外植體制備及初始芽誘導方法，其特征在于：包括外植體準備、外植體消毒處理以及初始芽誘導工序，采集赤皮青岡當年生嫩枝作為外植體，進行消毒處理后，獲得的無菌外植體接種于初始芽誘導培養基中，在適宜環境中培養20-30天后，獲得生長快、活力旺盛的赤皮青岡初始芽，其操作步驟如下：

（1）外植體準備：

在至少連續3天晴朗的氣候里，采集赤皮青岡的樹冠外圍生長健壯的當年生嫩枝作為外植體；

外植體消毒處理：

將外植體用無菌水沖洗干凈后，置于體積濃度為0.1-0.3 %的廣譜殺菌劑中浸泡20-30 min，取出外植體將其置于體積濃度為70 %酒精中浸泡1-2 min，再移入體積濃度為5-8 %的氯化汞溶液中浸泡10-20 min，取出放于體積濃度為10-25 %的雙氧水和2-5滴吐溫的混合液中攪拌浸泡20-30 min后，最后用無菌水洗3-4次，每次沖洗3-5 min；將外植體裁成帶至少1個腋芽，1.5-3cm長的莖段，視莖段木質化程度分類置放容器內，備用；

（3）初始芽誘導：將步驟（2）得到的外植體接種于誘導培養基中；所述的誘導培養基為：改良1/2MS培養基 + 噻苯隆（TDZ）0.5-2.0 mg·L^-1 + MT 1.0-3.0 mg·L^-1 + 6-BA 1.0-3.0 mg·L^-1 + 葡萄糖30 g·L^-1 + 瓊脂3.5 g·L^-1 + 0.1-0.3 %廣譜殺菌劑；初始芽誘導培養周期為：20-30天，置于適宜條件下進行初始芽誘導培養，獲得生長健壯、活力旺盛的赤皮青岡初始芽。

2.根據權利要求1所述的赤皮青岡無菌外植體制備及初始芽誘導方法，其特征在于：所述的改良MS培養基的組成為：KNO₃ 1650 mg·L^-1；NH₄NO₃ 650 mg·L^-1；CaCl₂·2H₂O 230 mg·L^-1；MgSO₄·7H₂O 380 mg·L^-1；Ca(NO₃)₂·4H₂O 400 mg·L^-1；KH₂PO₄ 170 mg·L^-1；MnSO₄·H₂O 22.3 mg·L^-1；ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg·L^-1；CuSO₄·5H₂O 0.025 mg·L^-1；H₃BO₃6.2 mg·L^-1；Na₂MoO₄·2H₂O 0.025 mg·L^-1；KI 0.83 mg·L^-1；CoCl₂·6H₂O 0.025 mg·L^-1；維生素B₁ 1.5 mg·L^-1；維生素B₆ 0.6 mg·L^-1；煙酸 0.5 mg·L^-1；甘氨酸 2.0 mg·L^-1；肌醇 200 mg·L^-1。

3.根據權利要求1所述的赤皮青岡單株外植體制備及初始芽誘導方法，其特征在于：步驟（3）所述的適宜條件為：溫度：20±3℃，光照培養時間為：16 h，光照強度為：≤1000 lx。