[發明專利]一種用于鑒定膽木及其偽品的引物對及其應用在審
| 申請號： | 201710075850.1 | 申請日： | 2017-02-13 |
| 公開（公告）號： | CN108441570A | 公開（公告）日： | 2018-08-24 |
| 發明（設計）人： | 楊衛麗;施力云;王勇 | 申請（專利權）人： | 楊衛麗;施力云 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 571199 海*** | 國省代碼： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 膽木 引物 鑒別 植物分子生物學 樣品提取 偽品 應用 | ||
1.用于鑒定或輔助鑒定膽木的引物對，其特征在于：所述引物對為下列兩條單鏈DNA分子組成的引物對，分別為上游：cttctatataagatagataagagggct，下游：cttaatccacttggctacatccg。
2.用于鑒定或輔助鑒定膽木的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中含有權利要求1所述的引物對、dNTP、DNA聚合酶、熒光染料。
3.權利要求1所述引物對要求單獨包裝。
4.權利要求1所述的引物對，或權利要求2所述的試劑盒，鑒定或輔助鑒定待測中藥樣品中是否含有中藥膽木的方法，包括如下步驟：
(a)從待測樣品中提取基因組DNA為模版，采用權利要求1所述的引物對進行PCR擴增；
(b)為如下(b1)或(b2)：
(b1)根據步驟(a)所得PCR產物的大小，按照如下方法確定待測樣品中是否含有膽木藥材：若PCR產物中含有大小為250bp的DNA片段，則待測樣品中含有膽木藥材；若PCR產物中不含有大小為250bp的DNA片段，則待測樣品中不含有膽木藥材。
(b2)向步驟(a)擴增后的反應體系中加熒光染料，得到含有熒光染料的體系，若觀察到所述含有熒光染料的體系產生綠色熒光，則所述待測樣品中含有膽木藥材；若觀察到所述含有熒光染料的體系不產生綠色熒光，則所述待測樣品中不含有膽木藥材。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：在步驟(a)中，進行PCR擴增時采用的退火溫度是60℃。
6.根據權利要求4所述的方法。其特征在于：進行所述PCR擴增時采用的擴增程序為：94℃1min；94℃5s、60℃10s；30個循環。
7.根據權利要求4-6中任一所述的方法，其特征在于：在步驟(b2)中，所述含有的熒光染料體系是否產生綠色熒光是在365nm紫外波長下進行檢測。
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