[發(fā)明專利]一種快速鑒定象牙參與糙海參的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710072796.5 | 申請日： | 2017-02-10 |
| 公開（公告）號： | CN106755515B | 公開（公告）日： | 2020-06-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李振國;陳艷明;務(wù)勇圣;郭曉璐 | 申請（專利權(quán)）人： | 牡丹江友搏藥業(yè)有限責(zé)任公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6869;C12N15/53 |
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| 地址： | 157013 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 鑒定 象牙 參與 海參 方法 | ||
1.一種鑒定象牙參與糙海參的方法，其特征在于：
采用DNA條形碼分子鑒定方法鑒定象牙參(Holothuria fuscopunctata)與糙海參(Holothuria scabra)；所述DNA條形碼分子鑒定方法，其步驟主要包括：
(1)從待測的海參組織中分離提取總DNA；
(2)以該DNA為模板用一對特異性引物，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增出海參COI基因；
(3)然后取適量步驟(2)的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增出的COI基因產(chǎn)物用瓊脂糖電泳分離鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物大小，將產(chǎn)物進(jìn)行測序；
(4)根據(jù)測序結(jié)果，進(jìn)行分析比對，如果與基因序列SEQ ID NO.1的同源性在99％以上，即可判斷所述的待測組織即為象牙參來源；如果與基因序列SEQ ID NO.2的同源性在99％以上，即可判斷所述的待測組織即為糙海參來源；
其中步驟(2)中引物DNA的序列為：
COIef2：5’-ATGATAGGAGCCCCAGAC-3’；
COIer2：5’-TGGTTTACGCAATGGTAG-3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的擴(kuò)增條件為94℃預(yù)變性2分鐘，94℃變性30秒，48℃退火35秒，72℃延伸45秒，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸7分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于擴(kuò)增產(chǎn)物的擴(kuò)增片段為580bp，用1％-2％瓊脂糖電泳檢測。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的象牙參的DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)檢測基因序列為CO I基因，其基因序列SEQ ID NO.1為：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的糙海參的DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)檢測基因序列為CO I基因，其基因序列SEQ ID NO.2為：
6.一種象牙參DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)檢測序列，其特征在于，其序列為CO I基因，序列如SEQID NO.1所示：
7.一種糙海參DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)檢測序列，其特征在于，其序列為CO I基因，序列如SEQID NO.2所示：
8.如權(quán)利要求6所述的象牙參DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)檢測序列或權(quán)利要求7所述的糙海參DNA條形碼標(biāo)準(zhǔn)檢測序列在象牙參或糙海參的鑒定中的應(yīng)用。
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