[發(fā)明專利]人葉酸代謝相關(guān)的三個(gè)SNP位點(diǎn)基因分型的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)和檢測試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710071665.5
• 申請(qǐng)日: 2017-02-09
• 公開（公告）號(hào): CN106701987B
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙書民;趙玉蓮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海五色石醫(yī)學(xué)研究股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;陸尤

1.一種人葉酸代謝相關(guān)的三個(gè)SNP位點(diǎn)基因分型的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于，所述三個(gè)SNP位點(diǎn)分別為：rs1801133、rs1801131、rs1801394；同時(shí)包含三個(gè)樣本分子標(biāo)簽位點(diǎn)：Amelogenin、rs57863450、rs35134728；上述6個(gè)基因位點(diǎn)在同一PCR擴(kuò)增體系相互兼容，同時(shí)擴(kuò)增；6個(gè)基因位點(diǎn)相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物及其熒光標(biāo)記如下：

第一個(gè)位點(diǎn)rs1801133：相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物寡核苷酸序列依次為SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3；FAM熒光素標(biāo)記SEQ ID No.3；

第二個(gè)位點(diǎn)rs1801131：相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物寡核苷酸序列依次為SEQ ID No.4、SEQ IDNo.5、SEQ ID No.6；FAM熒光素標(biāo)記SEQ ID No.6；

第三個(gè)位點(diǎn)rs1801394：相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物寡核苷酸序列依次為SEQ ID No.7、SEQ IDNo.8、SEQ ID No.9；FAM熒光素標(biāo)記SEQ ID No.9；

第四個(gè)位點(diǎn)Amelogenin：相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物寡核苷酸序列依次為SEQ ID No.10、SEQID No.11；FAM熒光素標(biāo)記SEQ ID No.11；

第五個(gè)位點(diǎn)rs57863450：相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物寡核苷酸序列依次為SEQ ID No.12、SEQID No.13；FAM熒光素標(biāo)記SEQ ID No.12；

第六個(gè)位點(diǎn)rs35134728：相應(yīng)的PCR擴(kuò)增引物寡核苷酸序列依次為SEQ ID No.14、SEQID No.15；FAM熒光素標(biāo)記SEQ ID No.14。

2.如權(quán)利要求1所述的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于，SEQ ID No.1-SEQ ID No.15所示寡核苷酸PCR擴(kuò)增引物的工作濃度為50?300nmol/L。

3.如權(quán)利要求1所述的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于，引物組合物由SEQ ID No.1-SEQ IDNo15所示寡核苷酸序列的PCR引物的干粉或溶液組成。

4.一種如權(quán)利要求1所述的PCR擴(kuò)增系統(tǒng)在制備用于檢測人葉酸代謝相關(guān)的三個(gè)SNP位點(diǎn)基因分型的試劑盒中的應(yīng)用。

5.一種人葉酸代謝相關(guān)的三個(gè)SNP位點(diǎn)基因分型檢測試劑盒，所述三個(gè)SNP位點(diǎn)分別為：rs1801133、rs1801131、rs1801394；同時(shí)包含三個(gè)樣本分子標(biāo)簽位點(diǎn)：Amelogenin、rs57863450、rs35134728；其特征在于，包含引物組合物容器、PCR反應(yīng)母液容器、PCR輔助液容器；其中：

所述引物組合物容器包含引物SEQ ID No.1～SEQ ID No.15組合物貯存液，貯存液濃度為相應(yīng)工作濃度的2~10倍；這里，SEQ ID No.1-SEQ ID No.15所示寡核苷酸PCR擴(kuò)增引物的工作濃度為50?300nmol/L；

所述PCR反應(yīng)母液容器內(nèi)有進(jìn)行PCR反應(yīng)的2~5倍反應(yīng)濃度的PCR反應(yīng)母液，PCR反應(yīng)母液包含：DNA聚合酶0.5~5U 、鎂離子1~5mmol/L、dNTP 40～400μmol/L以及Tris-HCl緩沖液20~100mmol/L；

所述PCR輔助液容器內(nèi)有可使所述PCR以干血濾紙片為擴(kuò)增模板進(jìn)行相應(yīng)位點(diǎn)基因分型的緩沖體系，該緩沖體系以PBS為基液，包含濃度為1~2M的甜菜堿、濃度為10~30mM的(NH₄)₂SO₄，以及濃度為2%~8%的DMSO。