[發明專利]一種用于鑒定米象和玉米象的試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201710071518.8
• 申請日: 2017-02-09
• 公開（公告）號: CN106755514B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 唐培安;李非凡;宋偉
• 申請（專利權）人: 南京財經大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京市領專知識產權代理有限公司 11590
• 代理人: 林輝輪

本發明公開了一種用于鑒定米象和玉米象的試劑盒及其檢測方法，屬于生物檢測鑒定技術領域，試劑盒包括以下兩對引物對中的至少一對：引物對1由序列1和序列2兩條單鏈DNA組成，序列1：5’?TTGATTACTTCCACCCTCC?3’，序列2：5’?AAGTATAGTGATTGCTCCT?3’；所述引物對2由序列3和序列4兩條單鏈DNA組成，序列3：5’?TTATTAGTTACGAAAGAGGA?3’，序列4：5’?ATCAAAGGGATGTAGGAGAA?3’；鑒定米象和玉米象的方法，具體步驟如下：提取米象或玉米象的基因組DNA，將基因組DNA置于?20℃下；以基因組DNA為模板，分別對引物對1和引物對2進行PCR擴增；將PCR擴增產物分別進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，在凝膠成像系統中觀察并成像分析。本發明中的鑒定方法可以快速準確地鑒定出米象和玉米象，為害蟲防治技術的合理選擇提供依據。

技術領域

本發明涉及生物檢測鑒定技術領域，尤其涉及一種用于鑒定米象和玉米象的試劑盒及其檢測方法。

背景技術

米象和玉米象同屬鞘翅目象甲科米象屬，是該屬中分布最廣、為害最嚴重、經濟意義最大的兩種倉儲害蟲。現有研究表明，米象和玉米象在我國各地均有分布，其幼蟲和成蟲可危害谷物、豆類、油料等多種農產品與其加工產品，大量發生時能造成嚴重的經濟損失，是毀滅性儲糧害蟲。近年來研究發現，米象和玉米象在生活習性上有很多區別。例如，玉米象的耐寒力顯著強于米象，表明低溫殺蟲技術對米象的防治效果好，而對玉米象無效。此外，在生殖力、野外生存能力、對藥劑抗性遺傳等方面也存在著顯著差異。因此，快速識別害蟲種類，對于合理選擇防治措施具有重要的意義。然而，米象和玉米象的外部形態非常相似，目前還沒有公認的外部形態特征對兩種害蟲進行分類鑒定，只能依靠解剖成蟲的外生殖器進行鑒別，這就對鑒定人員的技術提出了較高的要求，不能滿足快速、準確鑒定的需求。

目前未見有關米象和玉米象的分子鑒定方法研究，而通過傳統的分子檢測方法，利用DNA測序技術雖然能夠準確鑒定，但一方面測序成本比較高，另一方面測序過程所需時間周期比較長，達不到快速的要求。因此目前需要盡快建立一套快速靈敏的鑒定檢測方法，以便對米象和玉米象作出準確、快速的鑒定，從而為害蟲防治技術的合理選擇提供依據，確保我國儲糧安全。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供了一種用于鑒定米象和玉米象的試劑盒，所述試劑盒包括以下兩對引物對中的至少一對：引物對1由序列1和序列2兩條單鏈脫氧核糖核酸組成，序列1：5’-TTGATTACTTCCACCCTCC-3’，序列2：5’-AAGTATAGTGATTGCTCCT-3’；引物對2由序列3和序列4兩條單鏈脫氧核糖核酸組成,序列3：5’-TTATTAGTTACGAAAGAGGA-3’序列4：5’-ATCAAAGGGATGTAGGAGAA-3’；所述序列1由19個核苷酸組成，序列2由19個核苷酸組成，序列3由20個核苷酸組成；序列4由20個核苷酸組成。

進一步地，所述試劑盒還包括聚合酶鏈式反應緩沖液、脫氧核糖核酸聚合酶和4種脫氧核糖核苷三磷酸。

進一步地，所述引物對1和引物對2中的兩條單鏈脫氧核糖核酸的摩爾數相等。

進一步地，所述引物對1特異于米象，引物對2特異于玉米象。

本發明還提供了一種試劑盒應用于鑒定米象和玉米象的方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)提取米象或玉米象的基因組脫氧核糖核酸，將提取的脫氧核糖核酸置于-20℃下，備用；

(2)以步驟(1)中備用的脫氧核糖核酸為模板，分別對引物對1和引物對2進行聚合酶鏈式反應，即可得到相應的聚合酶鏈式反應產物；

(3)將步驟(2)中的聚合酶鏈式反應產物分別進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，溴化乙錠染色后，在凝膠成像系統中觀察并成像分析。