[發明專利]白色桿菌zjut528及在拆分甲霜靈中的應用

有效

• 申請號: 201710069366.8
• 申請日: 2017-02-08
• 公開（公告）號: CN106754560B
• 公開（公告）日: 2019-11-29
• 發明（設計）人: 張朝暉;張利坤
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P41/00;C12P13/02;C12R1/01
• 代理公司: 33201 杭州天正專利事務所有限公司
• 代理人: 黃美娟;李世玉<國際申請>=<國際公布>

1.白色桿菌Albibacter sp.zjut528，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2015年10月29日，保藏編號CCTCC NO：M2015650，保藏地址：中國，武漢，武漢大學，郵編430072。

2.一種權利要求1所述白色桿菌zjut528在拆分甲霜靈中的應用。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于所述的應用以白色桿菌zjut528經發酵培養獲得的濕菌體為催化劑，以外消旋甲霜靈為底物，以異丙醇為助溶劑，以pH7.5～8.5的磷酸緩沖液為反應介質構成反應體系，在30～35℃、150～200r/min條件下進行催化反應，反應完全后，將反應液分離純化，獲得(R)-甲霜靈酸。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述催化劑用量以濕菌體重量計為25～40g/L反應體系，所述底物外消旋甲霜靈加入量為30～50mmol/L反應體系，所述助溶劑加入終濃度為10～20ml/L反應體系。

5.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述濕菌體的制備方法為：

(1)將白色桿菌zjut528接種至斜面培養基，在30℃培養2～3天，獲得斜面菌體；所述斜面培養基終濃度組成：NaCl0.5g/L，MgSO₄·7H₂O1.0g/L，K₂HPO₄ 1.0g/L，NH₄NO₃ 1.0g/L，酵母浸出粉5.0g/L，葡萄糖5.0g/L，瓊脂20g/L，溶劑為水，pH值自然；

(2)將斜面菌體接種至種子培養基，在30℃培養48h，獲得種子液；所述種子培養基終濃度組成為：NaCl0.5g/L，MgSO₄·7H₂O1.0g/L，K₂HPO₄ 1.0g/L，NH₄NO₃ 1.0g/L，酵母浸出粉5.0g/L，葡萄糖5.0g/L，溶劑為水，pH值自然；

(3)將種子液以體積濃度1％～10％接種量接種至發酵培養基，在30℃、180r/min的條件下培養48h，將發酵液離心，棄上清液，獲得濕菌體；所述發酵培養基終濃度組成：NaCl0.5g/L，MgSO₄·7H₂O1.0g/L，K₂HPO₄ 1.0g/L，NH₄NO₃ 1.0g/L，酵母浸出粉5.0g/L，葡萄糖5.0g/L，外消旋甲霜靈1.0g/L，甲醇5.0g/L，甲醇在培養基滅菌后，接種前加入，溶劑為水，pH值自然。

6.如權利要求3所述的應用，其特征在于所述反應液分離純化的方法為：反應結束后，用氨水調節反應液的pH值至8-9，加入等體積的乙酸乙酯萃取分層，去除有機相a得到水相a，將水相a用鹽酸調節pH值為3～5，加入等體積的乙酸乙酯萃取分層，去除水相b得到有機相b，再將有機相b在35℃～60℃旋轉蒸發除去乙酸乙酯，獲得(R)-甲霜靈酸。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述( R)-甲霜靈酸制備( R)-甲霜靈的方法為：取(R)-甲霜靈酸溶于無水甲醇中，冰浴滴加二氯亞砜，滴加完畢后冰浴反應10min，然后回流反應4h，旋蒸濃縮至無液體流出，獲得濃縮液；將濃縮液溶于乙酸乙酯，用質量濃度5％Na₂CO₃水溶液洗滌2次，去離子水洗滌1次，去除洗滌液后加入無水硫酸鎂除水，過濾后旋蒸至干，得到(R)-甲霜靈；所述二氯亞砜與(R)-甲霜靈酸物質的量之比為1.1:1。