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[發(fā)明專利]一種土壤蛋白質(zhì)的提取方法在審

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201710068838.8 申請(qǐng)日: 2017-02-08
公開(公告)號(hào): CN106632582A 公開(公告)日: 2017-05-10
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 李乃薈;吳鳳芝;陳宇飛;周新剛;劉守偉;潘凱 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
主分類號(hào): C07K1/14 分類號(hào): C07K1/14;C07K1/30
代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245 代理人: 關(guān)暢,吳愛琴
地址: 150030 黑龍*** 國(guó)省代碼: 黑龍江;23
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 土壤 蛋白質(zhì) 提取 方法
【說明書】:

技術(shù)領(lǐng)域

發(fā)明涉及一種土壤蛋白質(zhì)的提取方法。

背景技術(shù)

環(huán)境宏蛋白質(zhì)組學(xué)是近年來興起的一種研究技術(shù),該技術(shù)可以將土壤中復(fù)雜的微生物群體有效的進(jìn)行綜合分析,以揭示土壤生態(tài)系統(tǒng)中的變化。

土壤環(huán)境中宏蛋白質(zhì)組學(xué)的研究問題的關(guān)鍵在于,土壤蛋白質(zhì)的提取和分析,其中蛋白質(zhì)的提取是研究土壤環(huán)境的重點(diǎn)。土壤蛋白質(zhì)的提取是土壤蛋白質(zhì)組學(xué)研究的前提,然而由于土壤蛋白質(zhì)提取方法的缺乏,當(dāng)前土壤蛋白質(zhì)組學(xué)的研究還不能有效的開展。因此,本發(fā)明針對(duì)土壤宏蛋白質(zhì)提取方面的關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化,以期本發(fā)明能在土壤宏蛋白質(zhì)組學(xué)研究中做出一定貢獻(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種有效的土壤蛋白質(zhì)的提取方法。

本發(fā)明所提供的土壤蛋白質(zhì)的提取方法,包括下述步驟:

1)向土壤樣品中加入土壤蛋白質(zhì)提取緩沖液,震蕩,靜置;

2)置于沸水中加熱,于0℃冰水中冷卻,震蕩,離心;

3)將上清液過濾,向已過濾的上清液中加入Tris飽和酚,震蕩,離心,棄去上清液,收集下層苯酚溶液;

4)向下層苯酚溶液中加入甲醇醋酸銨溶液,-20℃放置6h-8h;

5)離心,將上清液移出,收集蛋白質(zhì)沉淀,將蛋白質(zhì)沉淀用丙酮清洗,凍干,得到蛋白質(zhì)干粉。

上述方法步驟1)中,所述土壤蛋白質(zhì)提取緩沖液為中性的蛋白質(zhì)提取緩沖液,具體可為pH6.8的蛋白質(zhì)提取緩沖液。

所述pH6.8的蛋白質(zhì)提取緩沖液的配制方法為:稱取十二烷基硫酸鈉(SDS)1.25g,三羥甲基氨基甲烷(Tris)1.2114g,NaCl 0.8766g,二硫蘇糖醇(DTT)0.386g,加入70ml雙蒸水溶解,使用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至pH 6.8,最后使用雙蒸水定容至100ml,即可。

所述土壤樣品與土壤蛋白質(zhì)提取緩沖液的配比為1.8g-2.2g:5ml。

所述震蕩的速度為3000rpm-3200rpm,時(shí)間為10-20min,具體可為15min。

所述靜置的時(shí)間為3-5min,具體可為3min。

上述方法步驟2)中,所述加熱的時(shí)間為5-15min,具體可為10min。

所述冷卻的時(shí)間為3-5min,具體可為3min。

所述震蕩的速度為3000rpm-3200rpm,時(shí)間為5-10min,具體可為5min。

所述離心的條件為:4℃下4500-5500rpm離心5-10min,具體可為4℃下5000rpm離心5min。

上述方法步驟3)中,所述過濾采用0.45μm的尼龍濾膜。

所述Tris飽和酚的pH值為8.0。

所述上清液與Tris飽和酚的配比為3-4ml:2ml。

Tris飽和酚購(gòu)自北京索萊寶科技公司。

所述震蕩的速度為3000rpm-3200rpm,時(shí)間為15-30min,具體可為20min。

所述離心的條件為:4℃下10000-13000rpm離心15-20min,具體可為4℃12000rpm離心20min。

上述方法步驟4)中,所述甲醇醋酸銨溶液的濃度為0.1M。

所述甲醇醋酸銨溶液的配制方法為:稱取0.7708g醋酸銨溶于80ml甲醇溶液中,并定容至100ml。

所述甲醇醋酸銨溶液與苯酚溶液的體積比為5-6:1。

上述方法步驟5)中,所述離心的條件為:4℃下13000-15000rpm離心15-20min,具體可為4℃15000rpm離心20min。

所述丙酮為預(yù)冷的丙酮。

所述清洗可進(jìn)行多次,具體可為3次。

所述凍干的溫度為-80℃。

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