[發(fā)明專利]一種鯛魚抗氧化多肽及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710068499.3
• 申請日: 2017-02-08
• 公開（公告）號: CN106589068B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 汪少蕓;方菲;胡冬一;蔡茜茜;陳旭;方衛(wèi)東
• 申請（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊;陳彩芳

本發(fā)明提供了一種鯛魚抗氧化多肽及其制備方法，該方法以鯛魚魚皮或魚鱗蛋白為原料，通過對酸性蛋白酶的酶解，分離純化得到純抗氧化多肽，其氨基酸全序列為：ASTSNLKKAVHL。本發(fā)明消除了天然抗氧化劑所具有的缺陷并且消除了公眾對人工合成抗氧化劑的憂慮，為開發(fā)基于食品源的抗氧化多肽以及探索其在食品、醫(yī)學(xué)上的廣泛應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供了一種鯛魚抗氧化多肽及其制備方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

氧化是一個自由基介導(dǎo)的過程，它會對食品和生物系統(tǒng)造成許多不利的影響。在好氧器官內(nèi)，與動脈硬化、癌癥等多中疾病相關(guān)的游離自由基會不可避免地隨著氧代謝的過程而產(chǎn)生。在食品中，食品營養(yǎng)成分的氧化會產(chǎn)生過氧化物，其不僅會影響食品的營養(yǎng)價值，引起食品品質(zhì)下降，嚴重的甚至還會導(dǎo)致攝入者的身體發(fā)生疾病。因此，尋找安全的抗氧化劑以抑制過氧化物產(chǎn)生一直是生化營養(yǎng)學(xué)的研究熱點。由于BHT、TBHQ等化學(xué)合成抗氧化劑比天然抗氧化劑具有更好的效果和更便宜的價格，因此其已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)中。但是，目前有研究發(fā)現(xiàn)合成抗氧化劑對人體肝、脾、肺等器官具有蓄積性致癌作用，從而引起了人們對其安全性的擔憂，并且開始逐漸限制其在食品中的使用。于是人們把目光轉(zhuǎn)向天然抗氧化劑。α-生育酚是一種被最普遍使用的天然抗氧化劑，它能有效保持食品中油脂的穩(wěn)定性，但是卻不利于食品保存。因此，我們有必要尋找一種其它來源的安全的天然抗氧化劑。

多肽是分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一類化合物，使蛋白質(zhì)具有一定的生理功能。在人類的生命活動中，肽在體內(nèi)的消化吸收優(yōu)于游離的氨基酸，且有著區(qū)別于氨基酸的體內(nèi)輸送體系。某些短肽在提供人體生長、發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì)的同時，還能夠防病治病，調(diào)節(jié)人體機能，這些具有生物活性的多肽被稱為生物活性肽。

鯛魚加工過程產(chǎn)生的下腳料浪費等原因造成資源浪費，甚至是環(huán)境污染。鯛魚魚皮或魚鱗中含有大量蛋白質(zhì)，且其組成均衡，利用現(xiàn)代生物技術(shù)對蛋白質(zhì)資源進行深加工，合理的選用酶類等，通過工藝優(yōu)化將使得抗氧化活性肽的研究具有更廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種鯛魚抗氧化多肽及其制備方法，使抗氧化活性得以高效實現(xiàn)。

本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種抗氧化多肽，所述抗氧化多肽的氨基酸序列為：ASTSNLKKAVHL。

一種抗氧化多肽的制備方法，以鯛魚魚皮或魚鱗為原料提取蛋白，然后采用酸性蛋白酶對其進行酶解，分離純化、冷凍干燥得到抗氧化多肽。

所述酶解條件為：pH為4.5、溫度50℃、酶解時間為8h、酶-底物配比為3200U/g；所述酶為酸性蛋白酶。

所述分離純化的手段包括超濾、CM Sepharose C25離子交換色譜、Sephadex G-50分子篩和RP-HPLC反相高效液相色譜。

所述分離純化的具體步驟為：

（1）酶解產(chǎn)物首先利用膜過濾系統(tǒng)對鯛魚多肽溶液進行超濾分離，利用分子量截留范圍不同的超濾膜對酶解產(chǎn)物進行分離，得到不同分子量的多肽，包括≥3000 Da、1500-3000 Da、 ≤1500 Da等組分；

（2）收集具有最佳抗氧化活性的組分，再用CM Sepharose C25離子交換色譜進行分離，上樣后洗去未吸附組分，再以含0～0. 50mol/L NaCl的0.02mol/L、pH4.5乙酸-乙酸鈉緩沖液進行線性梯度洗脫，流速為0.5ml/min，在215nm下進行測量，測定各吸收峰對應(yīng)的洗脫組分的抗氧化活性；

（3）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再用Sephadex G-50凝膠色譜進行分離，洗脫液為去離子水，流速為0.5ml/min，在215nm下進行測量，測定各吸收峰對應(yīng)的洗脫組分的抗氧化活性；