[發明專利]一種有效增強對蝦免疫力和抗病力的中草藥復合液

在審

• 申請號: 201710067231.8
• 申請日: 2017-02-06
• 公開（公告）號: CN106581152A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 王文琪;徐申波;楊寧;任貽超;王鑫
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A61K36/539
• 分類號: A61K36/539;A61P37/04;A61P31/04
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明涉及的是中草藥復合液技術領域，具體的說是一種有效增強對蝦免疫力和抗病力的中草藥復合液。

背景技術

隨著集約化、高密度養殖的迅速發展，水產疾病頻繁暴發，目前都是依賴于使用大量的化學藥物和抗生素來解決，這造成了許多問題，不僅會使細菌等病原微生物對這些藥物產生抗藥性，而且藥物的長期使用也會使養殖品種的質量下降，導致嚴重的藥物殘留，而藥物殘留對人體構成許多如臟器受損等潛在的威脅。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的缺陷和不足，提供了一種有效增強對蝦免疫力和抗病力的中草藥復合液。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種有效增強對蝦免疫力和抗病力的中草藥復合液，制備方法如下:

1、黃芪回流提取：取黃芪原料10g，粉碎，加入150ml無水乙醇，水浴中保持沸騰回流提取約1.5h，放冷后過濾；在藥渣中分別添加100、50ml無水乙醇提取2次，過濾，合并濾液，旋轉蒸發儀濃縮，溫度設定50℃并回收乙醇，濃縮至10ml，4℃保存備用；

2、黃岑水煎的提取：稱取黃岑藥材10g，加150ml蒸餾水浸泡30min，加熱至沸騰文火保持30min，用六層紗布過濾，藥渣再加100ml蒸餾水，加熱至沸騰文火保持30min，六層紗布過濾，合并2次濾液，旋轉蒸發儀濃縮，溫度設定55℃，115℃高壓滅菌20min，4℃保存備用；

3、中草藥復合液的制備方法：將1和2的液體，按1:1的比例進行混合，將無水乙醇換為60％乙醇提取中草藥材有效成分，其他條件不變，制備得到中草藥復合液。

本發明的有益效果為：該中草藥復合液是在提取中草藥有效成分的基礎上，優化配伍復合而成，不僅可以保障藥效的穩定性，還可以使得劑量精準控制，對對蝦養殖中的常見細菌病有良好的效果，具有無毒、無藥物殘留、使用安全方便、功能全面等優點。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合具體實施方式，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施方式僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

實驗所用中國對蝦、凡納濱對蝦購于青島市紅島東大洋養殖場。兩種養殖對蝦生物體長均為8.5±0.5cm，體色正常，健康活潑。暫養馴化7天，海水鹽度為30，pH為8.5，溫度為22±0.5℃，連續充氣，日換水2次，換水量為1/3-1/2，并投喂對蝦配合飼料。

設對照組和實驗組，每組4個重復，實驗組用添加了中草藥浸泡后的飼料飼喂，對照組飼喂未添加中草藥的飼料，保持水溫、供氧、飼喂條件等一致，養殖30天。定期測定抗菌活力(副溶血弧菌和哈維氏弧菌)、酚氧化酶和溶菌活力等指標。

1、樣品制備

用消毒的5號針頭和2毫升注射器由頭胸甲后插入心臟取血，注射器中預先加入已消毒的預冷抗凝劑,使血液與抗凝劑最終比例為1：1，血液置于冰箱(4℃)中保存過夜；低速離心(2000-3000r/min)10-15min,將析出的藍色血清傾出，進行各項指標的測定。

2、測定方法

溶菌活力和抗菌活力測定分別以溶壁微球菌(Micrococcus lysoleikticus)凍干粉和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)為底物，參照Hultmark等改進的方法[10]；酚氧化酶活力的測定以L-DOPA為底物，按Ashida的方法[11]進行。以上各種方法均有改進。

3、抗菌活力測定

菌懸液的制備：實驗所用細菌為副溶血弧菌、哈維氏弧菌。將菌種接種于2116E斜面固體培養基上，30℃下培養18-20小時。然后用0.1mol/L,pH＝6.4的磷酸鉀鹽緩沖液從固體斜面上將菌洗下作為底物，并配成一定濃度的懸濁液(O.D.570nm＝0.3—0.5)。

抗菌活力測定:分別取3ml上述懸濁液于試管內置于冰浴中，再各加入50μl待測血清混勻，測其保溫前試液在570nm波長處的光密度值(A0)。然后將試液移入37℃溫浴中30min，取出后立刻再置于冰浴內10min以終止反應，測其經溫浴后的試液在570nm波長處的光密度值(A)。抗菌活力按下式計算：

Ua2＝(A0-A)/A

(注：為消除血藍素的干擾，用空白血清為對照，于570nm波長處測其的光密度值，以校正A0、A值。)

3.2.2.2溶菌活力測定