[發明專利]一種同時檢測化妝品中5種致病菌的基因芯片

在審

• 申請號: 201710064987.7
• 申請日: 2017-02-04
• 公開（公告）號: CN106636434A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 上海耐相智能科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C40B40/06
• 代理公司: 北京高航知識產權代理有限公司11530
• 代理人: 趙永強

技術領域

本發明涉及基因芯片和致病菌檢測技術領域，具體地，涉及一種同時檢測化妝品中多種致病菌的基因芯片。

背景技術

由于化妝品中含有氨基酸、蛋白質、脂肪、維生素、無機鹽和胎盤液等營養成分，是細菌、真菌等各種致病菌的生長、繁殖的理想環境，因此，化妝品保存方式尤為關鍵，稍有不注意就很容易收到微生物的污染。另外，化妝品的生產、運輸及使用都是在室溫，而室溫也是微生物滋生和繁殖的適宜溫度，化妝品的濕度也是非常適宜微生物生長的。如果污染的微生物是致病菌，在使用的過程中，還會感染消費者，嚴重危害身體健康。致病菌生長過程中會產生代謝產物和各種毒素，這些產物在人體免疫系統的識別下，可以變成刺激源和變應原，使使用者產生過敏或者受到感染，引起各種各樣的皮膚病，比如膚色異常、接觸性和光感性皮炎，掉頭發，頭發粗糙，痤瘡等皮膚病。

傳統的病原菌鑒定主要是生化鑒定和血清型分型，這些方法可以很準確的鑒定微生物，但是操作時間太長，操作也比較復雜，需要耗費大量的人力和物力。隨著技術的發展，也有一些新的技術涌現，包括實時定量聚合酶鏈反應、限制性片段長度多態性分析、單鏈構象多態性分析、熒光原位雜交、質譜技術、免疫技術等，這些方法與傳統方法比，操作更簡單，更快速；這些方法雖然在準確度和精度上有了很大的進步，但這些方法通常需要使用到大型儀器，檢測前也需要對樣品進行復雜的預處理，一般只有條件較好的實驗室才能開展此類實驗。

發明內容

針對現有技術上的不足，本發明提供一種同時檢測化妝品中5種致病菌的基因芯片，以彌補現有檢測化妝品中常見致病菌的缺陷，提高檢測的靈敏度和特異性，降低勞動強度和縮短檢測周期。

為了解決上述技術問題，本發明通過以下技術方案得以實現：

一種同時檢測化妝品中5種致病菌的基因芯片，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡聚核苷酸探針，所述寡聚核苷酸探針包括從大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌金黃亞種、銅綠假單胞菌、沙門氏菌IV和生孢梭菌的18S-28S rDNA間區，所述的寡聚核苷酸探針如SEQ ID NO:1–SEQ ID NO:5所示。

相對于現有技術，本發明的有益效果：

本發明將基因芯片技術引入化妝品中常見致病菌檢測領域，建立了一種可以同時檢測5中致病菌的基因芯片，本發明的基因芯片具有快速、靈敏、準確性高、重復性強等特點，利用本發明的基因芯片可以達到檢測化妝品中常見的致病菌的目的，由于操作簡便，準確性高，重復性強，本發明的基因芯片的靈敏度為0.085ng/μL，同時檢測5種致病菌；無論對于如出入境檢驗檢疫部門對化妝品的檢驗檢疫還是環境監測局對化妝品中致病菌的安全檢驗都有重要的應用價值。

附圖說明

此處的附圖被并入說明書中并構成本說明書的一部分，示出了符合本發明的實施例，并與說明書一起用于解釋本發明的原理。

圖1是本發明的結構示意圖。

其中：A-點陣區，A1-點樣區，B-標簽區域。

具體實施方式

結合以下實施例對本發明作進一步描述。

圖1是根據一示例性實施例示出的一種同時檢測化妝品中5種致病菌的基因芯片，如圖1所示，包括固相載體和固定在該固相載體上的寡聚核苷酸探針，所述寡聚核苷酸探針包括從大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌金黃亞種、銅綠假單胞菌、沙門氏菌IV和生孢梭菌的18S-28S rDNA間區，所述的寡聚核苷酸探針如SEQ ID NO:1–SEQ ID NO:5所示。

優選地，所述寡聚核苷酸探針包括陽性對照探針、陰性對照探針和熒光探針；所述陽性對照探針選自細菌16s rDNA保守區中選取的DNA片段或者其互補的DNA或RNA序列。

優選地，所述陽性對照探針為SEQ ID NO:6-SEQ ID NO:7；所述陰性對照探針為SEQ ID NO:8；所述熒光探針為SEQ ID NO:9。

優選地，在制備檢測大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌金黃亞種、銅綠假單胞菌、沙門氏菌IV和生孢梭菌試劑盒中的應用。

本發明選擇的多條長度在32bp±2bp、Tm72℃±2℃的探針，并通過多次雜交實驗進行探針篩選，最終得到如表1所示的探針。其中，編號為NO.6的探針序列選自所有真菌的18s rDNA，編號為NO.7的探針序列選自所有細菌的16s rDNA，作為陽性對照用來檢測是否有真菌、細菌；編號為NO.8的探針為多聚T片段，用作陰性對照，50％的DMSO，用作空白對照；編號為NO.9的探針作為熒光探針。

表1