[發(fā)明專利]一種藻類混合培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710064626.2
• 申請(qǐng)日: 2017-02-04
• 公開（公告）號(hào): CN106635816B
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邢榮蓮;邵逸文;馬偉偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 煙臺(tái)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/12
• 分類號(hào): C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種絲狀綠藻和底棲硅藻混合培養(yǎng)方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟1，分別培養(yǎng)制備接種用底棲硅藻泥和絲狀綠藻；

步驟2，將步驟1制備的絲狀綠藻按照濕重質(zhì)量占整個(gè)培養(yǎng)體積的10％-50％置入培養(yǎng)環(huán)境培養(yǎng)2～5天，然后按照接種的絲狀綠藻濕重的0.5％-5％的質(zhì)量接種步驟1制備的培養(yǎng)用底棲硅藻藻泥；

步驟3，將接種后的底棲硅藻和絲狀綠藻混合培養(yǎng)，混合培養(yǎng)過(guò)程中根據(jù)藻類的不同調(diào)控利于底棲硅藻和絲狀綠藻生長(zhǎng)的培養(yǎng)條件促進(jìn)藻類的生長(zhǎng)，直至絲狀綠藻藻體表面呈現(xiàn)底棲硅藻的顏色時(shí)停止培養(yǎng)；

步驟4，將絲狀綠藻撈取并包裹于紗布中進(jìn)行搓洗，將搓洗后的溶液自然沉降，然后過(guò)濾沉降物或離心處理得底棲硅藻，紗布中得底棲硅藻和絲狀綠藻的混合物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

步驟1，底棲硅藻/絲狀綠藻的單種暫養(yǎng)

底棲硅藻生物量的擴(kuò)大培養(yǎng)，將底棲硅藻種中加入含10-30mg/L硅酸鈉的f/2培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述f/2培養(yǎng)基中氮素用尿素替代，培養(yǎng)過(guò)程中溫度控制在15℃-25℃，持續(xù)光照控制在1000Lx-5000Lx，鹽度控制在30‰-35‰，pH控制在7.5-8.5，培養(yǎng)期間充氣；培養(yǎng)7-10天后，對(duì)培養(yǎng)的底棲型硅藻進(jìn)行4000轉(zhuǎn)/min離心處理10min-20min，去上清并收集培養(yǎng)用底棲硅藻藻泥；

選取藻體鮮綠、生長(zhǎng)狀態(tài)良好的絲狀綠藻進(jìn)行暫養(yǎng)，暫養(yǎng)過(guò)程中，絲狀綠藻濕重控制在0.5kg/L-1kg/L，培養(yǎng)過(guò)程中溫度控制在5℃-23℃，鹽度控制在30‰-35‰，自然光照控制在1000Lx-10000Lx，每天換水1/3-1/2，自然海水培養(yǎng)2天后得培養(yǎng)用絲狀綠藻；

步驟2，接種

取步驟1的培養(yǎng)用絲狀綠藻置入培養(yǎng)容器，使得接種的絲狀綠藻的濕重質(zhì)量占整個(gè)培養(yǎng)體積的10％-50％，添加適當(dāng)營(yíng)養(yǎng)鹽培養(yǎng)2-5天，然后按照接種的絲狀綠藻濕重的0.5％-5％的質(zhì)量接種步驟1制備的培養(yǎng)用底棲硅藻藻泥，所述底棲硅藻藻泥接種時(shí)將其用適當(dāng)海水懸浮后倒入進(jìn)行混合培養(yǎng)，使得底棲硅藻附著至絲狀綠藻上；

步驟3，混合培養(yǎng)

混合培養(yǎng)過(guò)程中溫度控制在15℃-25℃，一天中光照時(shí)間控制在8h-12h，其它時(shí)間為黑暗，其中，持續(xù)同一強(qiáng)度光照時(shí)，光照強(qiáng)度保持在5000-10000Lx；非持續(xù)同一強(qiáng)度光照時(shí)，逐漸改變光照強(qiáng)度，光照強(qiáng)度在開始的5h內(nèi)從1000Lx開始逐漸增強(qiáng)至15000Lx，然后保持最強(qiáng)光照1-2.5h后，剩余時(shí)間內(nèi)光照逐漸減弱至黑暗；該步驟中充氣，但充氣體量不宜過(guò)大；

按照上述條件培養(yǎng)7-15天，直至觀察到絲狀綠藻藻體表面呈現(xiàn)底棲硅藻的顏色時(shí)停止培養(yǎng)，進(jìn)行分離；

步驟4，底棲硅藻/絲狀綠藻的采收

停止培養(yǎng)后，將絲狀綠藻撈取并包裹于紗布中進(jìn)行搓洗，將搓洗后的溶液自然沉降，然后過(guò)濾沉降物或離心處理得底棲硅藻，紗布中得底棲硅藻和絲狀綠藻的混合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟2和步驟3中添加f/4-f/2培養(yǎng)基或硅酸鈉，或添加尿素、硝酸鈉、硝酸銨、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、碳酸氫鈉中的任意一種或多種。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，步驟3混合培養(yǎng)開始的1-3天內(nèi)不充氣、不攪動(dòng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟3培養(yǎng)至底棲硅藻有脫落現(xiàn)象時(shí)采收。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟4采收得的底棲硅藻和絲狀綠藻的混合物添加營(yíng)養(yǎng)鹽或底棲硅藻種子液后用于下一次混合培養(yǎng)。