[發明專利]一種人類微衛星不穩定性MSI檢測擴增引物組合物及試劑盒

在審

• 申請號: 201710059634.8
• 申請日: 2017-01-24
• 公開（公告）號: CN106701978A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 陳昌盛;林清華;王秋云;阮力;鄭立謀
• 申請（專利權）人: 廈門艾德生物醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司35204
• 代理人: 張松亭,游學明

技術領域

本發明生物技術領域，具體地涉及一種人類微衛星不穩定性MSI檢測擴增引物組合物及試劑盒。

背景技術

微衛星是廣泛分布于人類基因組中單個、兩個、三個甚至更多個的串聯重復核苷酸序列。微衛星不穩定性MSI的產生是由于DNA錯配修復系統(MMR)缺陷導致的微衛星序列丟失或增加，出現新的微衛星等位基因，它與MMR基因的異常相關。臨床研究表明：微衛星高不穩定性(MSI-H)的Ⅱ期結直腸癌患者預后較好，但不能從氟尿嘧啶單藥輔助化療中獲益；MSI檢測有助于輔助診斷遺傳性非息肉病性結直腸癌HNPCC(林奇綜合征)。實驗室常用的MSI檢測方法：熒光多重PCR片段分析法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種人類微衛星不穩定性MSI檢測擴增引物組合物及試劑盒。

本發明提供的技術方案如下：

一種人類微衛星不穩定性MSI檢測擴增引物組合物，包括檢測如下位點的引物對：

NR-24-F:5’-GCTGAATTTTACCTCCTGACT-3’(SEQ ID NO.1)

NR-24-R：5’-CGGAGATTGTGCCATTGCA-3’(SEQ ID NO.2)

BAT-25-F：5’-CGCCTCCAAGAATGTAAGTG-3’(SEQ ID NO.3)

BAT-25-R：5’-TTCTGCATTTTAACTATGGCTCT-3’(SEQ ID NO.4)

CAT-25-F：5’-TTATTGTTTTCAACCTAGAAACC-3’(SEQ ID NO.5)

CAT-25-R：5’-CAGTGAGCTGAGATCGTG-3’(SEQ ID NO.6)

BAT-26-F：5’-CTTATCAGATGATTCCAACTTTG-3’(SEQ ID NO.7)

BAT-26-R：5’-GCTTCTTCAGTATATGTCAATGA-3’(SEQ ID NO.8)

MONO-27-F：5’-GAGACAGAGCAAGACTCT-3’(SEQ ID NO.9)

MONO-27-R：5’-GTTCTGTCTCCTTTCTTAAGG-3’(SEQ ID NO.10)

Penta D-F：5’-GAGCCTGGAAGGTCGAA-3’(SEQ ID NO.11)

Penta D-R：5’-GAAATATTTGCCTAACCTATGGTC-3’(SEQ ID NO.12)

Penta E-F：5’-GACTGAGCAAGACTCAGTCT-3’(SEQ ID NO.13)

Penta E-R：5’-GATTACATAACATACATGTGTGTAAA-3’(SEQ ID NO.14)

本發明的又一技術方案為：

一種人類微衛星不穩定性MSI檢測擴增體系，包括前述的擴增引物組合物。

本發明試劑盒由熒光標記特異性引物、PCR緩沖液、核苷酸單體(dNTPs)等成分組成，以熒光多重PCR技術為基礎，檢測人類細胞中微衛星不穩定性MSI狀態。試劑盒含有7對熒光標記特異性引物，分別擴增5個單核苷酸重復標志物和2個五核苷酸重復標志物(詳見表1)。5個單核苷酸重復標志物分別為NR-24、BAT-25、CAT-25、BAT-26、MONO-27，這些標志物均為準單態性，即群體中幾乎所有個體該位點為同一等位基因純合狀態。2個五核苷酸重復標志物為Penta D和Penta E，具有較高的多態性和較低的微衛星不穩定性，用于判斷腫瘤組織和正常組織是否來源于同一個患者。PCR擴增產物用ABI3500Dx基因分析儀進行毛細管電泳分離，結果數據用GeneMapper軟件分析確定微衛星不穩定性狀態。

本發明的試劑盒優點如下：

1、所需樣本量少，可同時檢測五個單核苷酸標志物變異情況，定性檢測微衛星不穩定性狀態；

2、帶有質控樣本是否來源于同一患者的兩個五核苷酸重復標志物，避免樣本混淆錯誤；

3、操作簡便，結果判讀客觀簡單。

附圖說明

圖1為使用本發明試劑盒微衛星穩定性(MSS)樣本BAT-25與Penta D標志物毛細管電泳圖；

圖2為使用本發明試劑盒微衛星穩定性(MSS)樣本MONO-27、CAT-25與BAT-26標志物毛細管電泳圖；