[發(fā)明專利]一種生物磷鉀肥及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710056276.5
• 申請(qǐng)日: 2017-01-25
• 公開（公告）號(hào): CN106748270A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉加紅;高華鋒;解燕;孔垂思;楊濤;張瑞勤;余磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南省煙草公司曲靖市公司
• 主分類號(hào): C05G3/00
• 分類號(hào): C05G3/00;C05G3/04;C05F17/00
• 代理公司: 北京鼎宏元正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11458
• 代理人: 鄧金濤

1.一種生物磷鉀肥的制備方法，其特征在于：包括預(yù)處理、生物發(fā)酵、發(fā)酵后處理，其中，

預(yù)處理：將油菜秸稈、草炭烘干并粉碎，將磷礦、鉀礦和腐殖酸分別粉碎；

生物發(fā)酵：將預(yù)處理后的油菜秸稈、草炭、磷礦、鉀礦和腐殖酸與微生物種子液均勻混合得到混合物A，將混合物A堆捂后自然發(fā)酵，至物料變?yōu)榛液诤稚吹蒙镉袡C(jī)磷鉀肥基質(zhì)；

發(fā)酵后處理：將微生物種子液與生物有機(jī)磷鉀肥基質(zhì)混合均勻，得到生物磷鉀肥。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物磷鉀肥的制備方法，其特征在于，所述原料預(yù)處理是分別將磷礦、鉀礦粉碎至≤400目，將油菜秸稈粉碎至長(zhǎng)度≤5cm，腐植酸粉碎至粒徑≤0.45mm，草炭粉碎至≤0.45mm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物磷鉀肥的制備方法，其特征在于，將所述混合物A堆捂后自然發(fā)酵20-25天，當(dāng)溫度升至60-64℃時(shí)進(jìn)行翻堆操作。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物磷鉀肥的制備方法，其特征在于，所述生物發(fā)酵步驟中油菜秸稈、草炭、腐植酸、鉀礦、磷礦按質(zhì)量比 10：5-7：1-3：1-3：1-3混合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物磷鉀肥的制備方法，其特征在于，所述微生物種子液包括溶磷菌、解鉀菌和嗜鐵菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物磷鉀肥的制備方法，其特征在于，篩選所述溶磷菌、解鉀菌和產(chǎn)嗜鐵菌的步驟包括：

1）制備樣品稀釋溶液：選擇含有溶磷菌、解鉀菌或產(chǎn)嗜鐵菌的土壤10g與 100mL 無菌水混合，靜置 20min 后，以 200rpm 在振蕩培養(yǎng)箱中充分振蕩 30min使細(xì)胞分散，上層清液為菌懸液母液，然后將母液稀釋成10^-4、10^-5、10^-6稀釋度的樣品溶液；

2）倒平板：將培養(yǎng)基，在121℃滅菌15-30 min后冷卻至60℃，倒平板；

3）涂布：取10^-4、10^-5、10^-6三個(gè)稀釋度的樣品溶液各100μL，均勻的涂布于培養(yǎng)基表面；

4）培養(yǎng)：將涂有菌液的平板在 28-37℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)5-8天；

5）初步篩選：將平板上各菌落的暈圈與菌落直徑比按從大到小排列，取直徑比最大的5-20株，利用平板劃線法分離純化，將獲得的菌株接種至 LB 斜面培養(yǎng)基，置于4℃冰箱內(nèi)保藏；

6）接種培養(yǎng)：將初步篩選得到的菌株分別接種至培養(yǎng)基，使菌種含量為10¹¹個(gè)/g,在37℃ 200rpm 條件下振蕩培養(yǎng)；

7）測(cè)量：以不接菌種的培養(yǎng)基為對(duì)照，每隔8h用測(cè)定不同菌株發(fā)酵液內(nèi)可溶性鉀、磷或鐵的含量，測(cè)定3-5次，向發(fā)酵液中加入甘油，使甘油的體積分?jǐn)?shù)為20%，置于-20℃冰箱內(nèi)保藏保存。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的生物磷鉀肥的制備方法，其特征在于，

篩選所述溶磷菌使用的培養(yǎng)基的制備方法是：篩選所述溶磷菌使用的培養(yǎng)基的制備方法是：將5g葡萄糖、5g Ca₃(PO₄)₂、0.25g MgCl₂?6H₂O、0.25 g MgSO₄·7H₂O、0.2g KCl、0.1g (NH₄)₂SO₄和17g瓊脂混合，用去離子水定容至1000mL，PH為6.8-7.2；

篩選所述解鉀菌使用的培養(yǎng)基為亞力山鮑羅夫培養(yǎng)基；

篩選所述嗜鐵菌使用的培養(yǎng)基的制備方法是：分別取2mL 1mmol/L的CaCl₂:溶液、2mL 1mmol/L的MgSO₄·7H₂O溶液、60mL的10%的酸水解酪蛋白溶液混合，加入生物緩沖液Pipes，調(diào)pH6.8-7.0，用去離子水定容到1000mL，加入20g瓊脂粉均勻混合；其中所述10%的酸水解酪蛋白溶液混合前在121攝氏度條件下單獨(dú)滅菌15min。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物磷鉀肥的制備方法，其特征在于，所述微生物種子液中溶磷菌、解鉀菌和嗜鐵菌的個(gè)數(shù)比為1：2-3：1.5-2。