[發明專利]一種由四神丸制備的含藥血清及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710055403.X
• 申請日: 2017-01-25
• 公開（公告）號: CN106727701A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 孔晶;周亞楠;劉永紅
• 申請（專利權）人: 淮陰工學院
• 主分類號: A61K35/16
• 分類號: A61K35/16;A61K36/754;A61K36/79;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)32204
• 代理人: 柏尚春

技術領域

本發明屬于生物藥物領域，具體涉及一種由四神丸制備的含藥血清及其制備方法和在治療結腸癌上的應用。

背景技術

由于全球經濟的高速發展，城市化、工業化、人口老齡化進程不斷加快，環境污染逐漸加重，生活方式不斷改變(尤其是飲食)，導致惡性腫瘤的發病率和死亡率不斷升高，并呈持續上升趨勢。結腸癌(cancer of colon)是消化系統最常見的惡性腫瘤，與飲食的關系最為密切，是我國九大常見惡性腫瘤之一。結腸癌的首選治療方式仍然是盡早進行外科手術切除，但是由于每個人身體狀況和病情不一樣，一般手術后復發和轉移的幾率是很大的，而且手術價格昂貴。而中醫治療向來是尋求達到治本的目的，且費用相對較低，因此尋求合適的中藥進行開發、研究，成為國內外學者堅定不移的研究方向。已有學者在研發中藥治療疾病的進程上取得了不小的成就，例如：2015年10月，藥學家屠呦呦女士因發現青蒿素治療瘧疾的新療法而獲得諾貝爾科學獎。因此新的植物型藥物的開發和研制有不可小覷的潛力。

中藥作為一類天然藥物，已經在中國沿襲了幾千年。中藥具有多靶點的特點，這與腫瘤是由于多環節突變而非單一原因而發生的、多級的、多途徑的和多病灶的特點是相吻合的，因此中藥在結腸癌的預防及治療中更有優勢。本發明中用到的四神丸就是典型的中藥方劑。四神丸初次發現于宋代陳文忠著作的《陳氏小兒病源痘診方論》一書中，其由《普濟本事方》中記載的二神丸(即肉豆藉、補骨脂組成)和五味子散(即五味子、吳茱萸組方)兩劑藥方組成。兩劑藥方并用相輔相成，溫補脾腎，對固腸止瀉等癥狀藥用效果極佳。隨著時代的發展，該方己經超出了原有方劑的應用范圍，臨床中也以其作為基礎方廣泛應用于各科室，并取得了良好的療效。我們現今用的四神丸是由補骨脂、吳茱萸、肉豆蔻、五味子、生姜和紅棗六位藥材組成的，是治療脾腎虛寒型結腸炎的中藥方劑，對過敏性結腸炎、慢性結腸炎、潰瘍性結腸炎等癥均有良好療效，且已證實其能夠較佳地消除結腸炎相關的各種癥狀和有效修復、保護病人的腸粘膜。中藥的給藥方式主要有：口服給藥、灌腸給藥以及二者聯合用藥。因此運用中藥預防與治療癌癥是中醫藥發展的必然趨勢。

中藥血清藥理學的相關研究在近年來中藥或中藥復方研究中有了新的進展，它主要是通過模擬中藥或中藥復方在體內的消化、吸收、轉化、代謝的一些過程，然后通過采集服用(或注射)中藥的動物的血液并分離血清，進行體外培養實驗研究的一種新的方法。中藥服用或注射的方法及簡稱如下：靜脈注射(iv)、腹腔注射(ip)、口服(po)、皮下注射(ih)、灌胃(ig)、肌注(im)、靜滴(iv)等。這種實驗方法的提出，既可以在一定程度上排除中藥或中藥復方直接進行體外實驗產生的難以確定的因素干擾，也可以使實驗結果的可信度大大提高，更重要的是中藥血清使療效更加顯著。蘆沖等研究發現，半枝蓮醇提物灌胃大鼠后獲得的含藥血清對HT-29人結腸癌細胞有抑制作用，作用機制可能不僅與抑制細胞生長有關，還與阻滯細胞生長周期及誘導細胞凋亡有關。范欽等研究發現，九香蟲灌胃后處理得到的含藥血清孵育SW480人結腸癌細胞，可促使結腸癌細胞凋亡，并影響凋亡相關因子P53、FADD的表達，從而達到抗腫瘤作用。肖海娟等研究發現，腸胃清含藥血清能夠逆轉HCT116人結腸癌鉑類化療耐藥，其機制與促進腫瘤細胞DNA損傷、誘導凋亡有關。李素云等研究發現，扶正抑癌方含藥血清通過上調上皮鈣黏蛋白表達和下調神經鈣黏蛋白的表達，抑制LoVo人結腸癌細胞的間葉表型細胞即發生上皮間質化轉變，從而降低lovo細胞的侵襲力和運動能力。目前常用的結腸癌細胞系有HCT116，HCT8，HT-29，LS174T，LoVo，SW480，SW620等。但暫未發現使用由四神丸含制備的藥血清對LS174T結腸癌細胞做相關研究的報道。

發明內容

發明目的：針對現有技術存在的問題，本發明提供一種由四神丸制備的含藥血清；該含藥血清可有效抑制結腸癌細胞的增殖、促進其凋亡、抑制其轉移。

本發明還提供一種由四神丸制備的含藥血清的制備方法及其應用。

技術方案：為了實現上述目的，如本發明所述的一種由四神丸制備的含藥血清，所述含藥血清為將四神丸對大鼠進行灌胃后，采血得到。

其中，所述四神丸由肉豆蔻、補骨脂、五味子、吳茱萸和大棗組成，經磨粉、煮沸、煎煮后，將提取液過濾并且蒸餾濃縮得到膏體，再經冷凍干燥后粉碎得到。

所述所大鼠為清潔級SD雄性大鼠，大鼠購自揚州大學比較醫學中心，體重為250～400g。

本發明所述的由川芎醇提物制備的含藥血清的制備方法，包括如下步驟：