[發明專利]一種針對尿路上皮癌的尿脫落腫瘤細胞的免疫熒光染色技術

在審

• 申請號: 201710054588.2
• 申請日: 2017-01-24
• 公開（公告）號: CN106944163A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 韓平疇;金百冶;陳安琪;傅廣候
• 申請（專利權）人: 瑞漢智芯醫療科技(嘉善)有限公司
• 主分類號: B01L3/00
• 分類號: B01L3/00;G01N33/533;G01N33/574
• 代理公司: 上海光華專利事務所31219
• 代理人: 李艷,許亦琳

技術領域

本發明屬于生物體液體外檢測領域，具體涉及一種針對尿路上皮癌的尿脫落腫瘤細胞的免疫熒光染色技術。

背景技術

1、臨床現役技術-尿脫落細胞學檢查：尿脫落細胞學檢查(Cytology)是目前臨床上普遍使用的尿路上皮癌檢測方法。為尋找腫瘤細胞，該方法依賴病理醫生對涂片進行主觀觀察(針對細胞的細胞核、染色質、胞漿等因素對細胞進行判斷)，主要有以下缺點：

(1)檢測敏感度低，一般只有30-50％。

(2)閱片完全依賴于病理醫生的主觀經驗，不同病理醫生之間的判斷結果或不一致。

(3)染色過程繁瑣，人工參與度大、工作強度大。細胞染色效果受人員經驗、熟練度的影響。

2、臨床現役技術-膀胱鏡、輸尿管軟鏡檢查

膀胱鏡、輸尿管軟鏡檢查是目前臨床診斷尿路上皮癌的金標準。其通過導管將窺鏡經尿道傳送至目標區域，對可疑占位進行成像、觀察。但仍具有如下缺陷：

(1)屬于侵入式檢查，患者所承受的痛苦大；

(2)腫瘤發展到肉眼可見時才能被觀察到，不利于早期診斷.

3、其他在研技術-基于微濾膜的尿液細胞檢查

為克服傳統尿脫落細胞學檢查敏感度低的缺點，一些研究組使用微濾膜來檢測尿脫落腫瘤細胞。相較于傳統尿脫落細胞學檢查，該方法利用濾膜過濾的原理捕獲尿脫落細胞，敏感度略有提升，但仍具有以下缺陷：

(1)捕獲到細胞后，仍僅采用傳統的病理學染色方法(巴氏染色)，該方法如同臨床現役的尿脫落細胞學檢查，高度依賴病理科醫生，受主觀因素的制約；

(2)該濾膜的濾孔口徑單一，為7.5um；然而尿路上皮癌患者尿液中的細胞成分復雜，除了腫瘤細胞，還有正常脫落的尿路上皮細胞、白細胞、紅細胞等，這些細胞尺寸均不一致，若使用單一孔徑，仍將導致視野中細胞成分混亂，干擾后續的判斷分析；

(3)無法對細胞的捕獲過程進行實時成像、監測、調控，例如：(a)在細胞量過剩導致濾膜堵塞的情況下，無法及時終止進程；(b)在流速過高導致細胞破損嚴重的情況下，無法實時控制流速；

(4)受最大載荷量的限制，當細胞數量過高，所有濾孔均被占據,該濾膜隨即失效；隨后而來的細胞將全部堵塞于濾膜，導致視野混亂，難以進行下一步細胞層面的判讀。

發明內容

為了克服現有技術中所存在的問題，本發明的目的在于提供一種針對尿路上皮癌的尿脫落腫瘤細胞的免疫熒光染色技術。

為了實現上述目的以及其他相關目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面提供了CK20蛋白和CD44v6蛋白共同用于制備或篩選尿脫落腫瘤細胞診斷試劑的用途。

優選地，CK20蛋白和CD44v6蛋白聯用共同作為生物標志物。

優選地，CK20蛋白和CD44v6蛋白共同用于制備或篩選尿脫落腫瘤細胞診斷試劑的用途，包括兩方面的內容，其一，CK20蛋白和CD44v6蛋白共同用于制備尿脫落腫瘤細胞診斷試劑，是指將CK20蛋白和CD44v6蛋白共同作為尿脫落腫瘤細胞的診斷指標應用于尿脫落腫瘤細胞診斷試劑的制備。在本發明一些實施方式中，列舉了將CK20蛋白和CD44v6蛋白共同作為標準品或陽性對照，用于尿液樣本中尿脫落腫瘤細胞的檢測。

其二，CK20蛋白和CD44v6蛋白共同用于篩選尿脫落腫瘤細胞診斷試劑，是指將CK20蛋白和CD44v6蛋白共同作為尿脫落腫瘤細胞的識別靶標篩選分別或同時特異性識別CK20蛋白和CD44v6蛋白的試劑(包括抗體或配體)，從而作為尿脫落腫瘤細胞診斷試劑。在本發明一些實施方式中，列舉了用分別特異性結合CK20蛋白和CD44v6蛋白的抗體來檢測尿液樣本中尿脫落腫瘤細胞。此外，也可以采用同時特異性結合CK20蛋白和CD44v6蛋白的抗體來檢測尿液樣本中尿脫落腫瘤細胞，例如雙特異性抗體，這些都是本領域技術人員所公知的技術，再次不在詳述。

優選地，所述腫瘤為尿路上皮癌。所述腫瘤選自但不限于膀胱癌、輸尿管癌、腎盂癌。

本發明的第二方面提供了分別或同時特異性識別CK20蛋白和CD44v6蛋白的試劑用于制備尿脫落腫瘤細胞診斷試劑盒的用途。

優選地，所述分別或同時特異性識別CK20蛋白和CD44v6蛋白的試劑選自分別或同時特異性結合CK20蛋白和CD44v6蛋白的抗體或配體。