[發明專利]一種利用唾液檢測人體疲勞的方法

有效

• 申請號: 201710053137.7
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106706929B
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 許巖麗;劉志軍;趙朝賢;李焰;丁敏;蘇現輝;劉鳳麗;熊南雁;王雪玲;劉小霞;席愛萍
• 申請（專利權）人: 河北工程大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/573
• 代理公司: 石家莊眾志華清知識產權事務所(特殊普通合伙) 13123
• 代理人: 張明月

本發明公開了一種利用唾液檢測人體疲勞的方法，包括提取收集唾液、向收集的唾液中加入吸附劑和蛋白酶抑制劑、檢測唾液中特定蛋白的含量等步驟，是通過檢測唾液中特定蛋白的含量來確定健康狀況。本發明屬于人體蛋白的檢測領域，是一種非侵入式的標志物檢測方法，不會破壞人體組織，其具有無創、無痛、快速的優點，具有重要社會意義和應用前景。

技術領域

本發明涉及一種利用唾液檢測人體疲勞的方法，屬于蛋白質檢測技術領域。

背景技術

蛋白質約占人體全部質量的18％左右，其與生命活動現象緊密聯系在一起的物質。機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與。人體內蛋白質的種類很多，性質、功能各異，但都是由20多種氨基酸(Amino acid)按不同比例組合而成的，并在體內不斷進行代謝與更新。

在現有技術中，蛋白質的提取、檢驗更多的是采用例如：抽血等人體侵入式的提取方式。2008年，美國南加州大學的丹尼(Denny)等在《蛋白組學研究雜志》發表文章指出，人的唾液中有1166種蛋白質。其中大部分蛋白質能同時在血漿和淚液中找到。當時研究者就提出，從這些蛋白質中可以找到與疾病相關的生物標志物，從而為今后的臨床診斷提示一種新方式。隨后也有研究陸續發現，人唾液中的C反應蛋白、α-1B糖蛋白、肌酐等水平與心血管疾病、癌癥、腎臟病等相關。但是，迄今尚未建立一種無創、便捷的唾液中蛋白質提取和檢測技術。

發明內容

本發明需要解決的技術問題是如何提供一種非侵入式的用生物分子進行蛋白質檢測的方法。

為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：

A、提取收集疑似疲勞人體的唾液；

B、向收集的唾液中加入吸附劑和蛋白酶抑制劑；

C、檢測唾液中特定蛋白的含量。

本發明技術方案的進一步改進在于：步驟A中提取唾液的具體方法是：先 用生理鹽水漱口不少于兩次，再用清水漱口不少于兩次，然后收集唾液。

本發明技術方案的進一步改進在于：每次漱口所用生理鹽水或清水的體積為20～30ml，每次的漱口時間為20～30s，漱口所用生理鹽水或清水的溫度為20～35℃。

本發明技術方案的進一步改進在于：唾液收集量不小于0.1毫升。

本發明技術方案的進一步改進在于：唾液收集后需要儲存在-80～-70℃下。

本發明技術方案的進一步改進在于：步驟B中吸附劑為PEG、聚乙烯吡咯酮、蔗糖或凝膠的一種，蛋白酶抑制劑為亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑彈性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素的混合物，步驟C中的特定蛋白為核連蛋白-2、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、胃蛋白酶或金屬蛋白酶中的一種或者它們的組合。

本發明技術方案的進一步改進在于：檢測唾液中蛋白的方法是：

將唾液進行離心處理得到上清液Ⅰ，向上清液Ⅰ中滴入蛋白質提取劑后冷凍一段時間，得到冷凍液；

將冷凍液進行離心處理，取出下層液并再次冷凍，得到蛋白干粉；

將蛋白干粉溶于水化液中，并離心處理，得上清液Ⅱ并與NH₄HCO₃溶液混合，再次離心處理后向得到的上清液中加入胰酶并控溫消化酶解，然后進行分子標記并測得蛋白的含量。

由于采用了上述技術方案，本發明取得的技術進步是：

本發明是通過特定方法提取人體唾液進行蛋白質檢測，是一種非侵入式的生物分子檢測方法，不會破壞人體組織，其具有無創、無痛、快速的優點。唾液作為體液之一，隨時都可以方便地收集到，無創、無痛。其適用于人體，也可以延伸到動物體等。