[發明專利]一種快速提取病毒RNA的試劑盒

有效

• 申請號: 201710052460.2
• 申請日: 2017-01-24
• 公開（公告）號: CN107058288B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 吳英松;劉天才;楊學習;陳瑤
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 單香杰

本發明屬于分子生物學檢測領域，公開了一種快速提取流感病毒RNA的試劑盒，所述試劑盒包含病毒裂解結合液，所述病毒裂解結合液含有聚醚醇、蔗糖、Tris?HCl；利用該試劑盒，只需一步操作即可使流感病毒的核酸釋放出來，后續的物質可以用于熒光PCR的檢測。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測技術領域，更具體地，涉及一種快速提取病毒RNA的試劑盒。

背景技術

核酸提取是核酸檢測整個技術流程的第一步，也是分子生物學中最關鍵的方法之一。它是下游核酸檢測和科學研究的基礎，抽提的核酸的質量及其完整性會直接影響臨床研究或診斷的結果。一般的核酸提取過程包括兩大步驟：樣品的裂解和純化。裂解指使樣品中的核酸釋放到反應體系中，純化則是指使核酸與反應體系中的其它成分，如蛋白質、鹽類以及其他雜質徹底地分離。常用的RNA的提取方法有TRIZOL法、異硫氰酸胍法、CTAB-LiCl法及國內外各生物公司的總RNA提取試劑盒等。RNA提取的經典方法是TRIZOL法，它是一種基于異硫氰酸肌/苯酚/氯仿抽提原理的方法，該法適用范圍廣，動植物都適用，提取的RNA基本無基因組DNA的污染，但是該法操作步驟繁瑣，提取試劑中使用了苯酚、氯仿等有毒試劑，而且該法不適用于富含多糖多酚材料RNA的提取。CTAB-LiCl法常被用來提取植物組織RNA的提取，但是由于CTAB木身是一個與SDS功能相類似的試劑，盡管它可和RNA以及DNA形成不溶的復合物，但CTAB法通常要結合其它操作，如再經LiCl沉淀等步驟，使得該法操作繁瑣，并且在抽提時使用有毒試劑氯仿。傳統的提取試劑由于提取得率相對較低，且步驟較為繁雜，給提取工作帶來一定影響，因此難以得到合格的RNA樣品。

磁珠法是近幾年才發展起來的核酸提取方法。磁珠的直徑幾十納米至數微米，在磁場下表現出磁性，由無機/有機或者無機/無機材料組成的外形呈現為球狀的復合粒子。磁珠法提取核酸不需要苯酚和氯仿等毒性大的有機溶劑，提取的核酸純度高、產量大。專利號為201010281633.6、201510023368.4的專利公開了提取病毒DNA/RNA的方法，但這些試劑組成比較復雜，提取步驟比較復雜，提純周期長，不利于客戶快速提取純化RNA。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術存在的上述缺陷，提供一種快速提取病毒RNA的試劑盒。

本發明的目的是通過以下技術方案予以實現的：

一種快速提取流感病毒RNA的試劑盒，所述試劑盒包含病毒裂解結合液，所述病毒裂解結合液含有聚醚醇、蔗糖、Tris-HCl。

本發明試劑盒的工作原理：樣本在病毒裂解結合液的作用下，可以使病毒的結構發生改變，使病毒RNA釋放出來。因此所述病毒裂解結合液不含抑制PCR反應的成分，所以產物可直接用于后續的PCR檢測。

優選地，所述聚醚醇的濃度為10～14%（V/V）。

優選地，所述病毒裂解結合液的pH為6.5～7.5。

優選地，所述蔗糖的濃度為20～50mM，Tris-HCl的濃度為10～50mM。

作為一種具體的實施方式，所述病毒解裂結合液的組成為：20～50mM蔗糖，10～50mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（Tris-HCl），10～14%（V/V）聚醚醇，溶劑為高壓滅菌水（pH值為6.5～7.5）。

本發明還提供一種利用所述RNA試劑盒進行核酸快速提取檢測的方法，是將樣本于病毒裂解結合液混合，震蕩室溫靜置5～10min后，取混合液進行PCR反應。

優選地，樣本和病毒裂解結合液的混合體積比為1～1.5：1。

優選地，混合液在PCR反應體系中的體積不超過25%。