[發(fā)明專利]一種檢測(cè)人類卵母細(xì)胞質(zhì)量的定量PCR檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710052367.1
• 申請(qǐng)日: 2017-01-24
• 公開（公告）號(hào): CN106701977B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛志剛;童曉文;紀(jì)亞忠;劉麒薇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市同濟(jì)醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686
• 代理公司: 上海卓陽知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發(fā)明涉及一種基于實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)人類卵丘細(xì)胞基因表達(dá)情況，進(jìn)而預(yù)測(cè)人類卵子質(zhì)量的試劑盒。本發(fā)明選擇MSTN、CTGF、NDUFA1、SCD5、VCAN、STAR和GAPDH共7個(gè)基因作為檢測(cè)對(duì)象，需要進(jìn)行人工授精的女性和正常女性的卵丘細(xì)胞為研究對(duì)象，通過單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組高通量測(cè)序，分析兩組對(duì)象間的表達(dá)譜差異，最終確定這6個(gè)基因與卵子質(zhì)量具有相關(guān)性，其中GAPDH作為內(nèi)參，進(jìn)而研發(fā)了預(yù)測(cè)卵子質(zhì)量的qPCR檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明的試劑盒以及操作步驟能適用于現(xiàn)有的定量PCR工作平臺(tái)，通過多個(gè)基因表達(dá)檢測(cè)并預(yù)測(cè)卵子質(zhì)量，縮短篩查時(shí)間，提高人工輔助生殖的成功率，降低治療總體費(fèi)用，縮短治療周期，對(duì)減輕不孕不育人群的負(fù)擔(dān)和痛苦具有積極意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及人工授精、試管嬰兒和胚胎移植等輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種檢測(cè)人類卵母細(xì)胞質(zhì)量的定量PCR檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

繁衍是人類的本能需要，孕育健康的寶寶不僅是家庭幸福的需要，也是種族延續(xù)、國(guó)家繁榮強(qiáng)盛的根本。2016年的統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，20年前我國(guó)育齡人群中不孕不育率僅為3％，而如今我國(guó)育齡人群中不孕不育率攀升到12.5％至15％，這一比例的升高，除了隨著社會(huì)進(jìn)步，檢測(cè)和統(tǒng)計(jì)逐漸普及和完善的原因之外，飲食方式、空氣質(zhì)量、水質(zhì)量、食物質(zhì)量、工作壓力、鍛煉因素、疾病情況等都有關(guān)系，這些因素都會(huì)對(duì)生育的重要生物基礎(chǔ)——卵子——的質(zhì)量造成重大的影響。人類生命的自然開始必須以精子細(xì)胞和卵子細(xì)胞的相遇并結(jié)合為基礎(chǔ)，健康的寶寶對(duì)于不能自然受孕的人群，人工干預(yù)是一條可能選擇的道路，人工干預(yù)的方式主要有人工授精、試管嬰兒和單細(xì)胞顯微注射。選擇質(zhì)量好的卵子對(duì)人工干預(yù)技術(shù)的成功具有積極的影響，卵丘細(xì)胞是卵子成熟過程的重要組成部分，我們的研究發(fā)現(xiàn)，可以通過測(cè)定卵丘細(xì)胞某些基因的表達(dá)來預(yù)測(cè)卵子的質(zhì)量，而卵子的質(zhì)量是由后續(xù)胚胎的發(fā)育情況進(jìn)行衡量的，這一檢測(cè)的意義在于可以極大的減少對(duì)卵子的損傷，提高卵子授精以及成功發(fā)育的幾率，降低患者的負(fù)擔(dān)和痛苦。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供測(cè)定基因表達(dá)量的試劑的新用途。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是，提供一種檢測(cè)人類卵母細(xì)胞質(zhì)量的定量PCR檢測(cè)試劑盒。

為實(shí)現(xiàn)上述第一個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

測(cè)定基因表達(dá)量的試劑在制備檢測(cè)人類卵母細(xì)胞質(zhì)量或檢測(cè)卵母細(xì)胞受精后胚胎質(zhì)量的試劑盒中的應(yīng)用，所述基因選自如下所述基因中的任意一種或多種組合：

1)MSTN；

2)CTGF；

3)NDUFA1；

4)SCD5；

5)VCAN；

6)STAR。

進(jìn)一步，所述試劑盒還包括測(cè)定GAPDH基因表達(dá)量的試劑。

進(jìn)一步，所述測(cè)定基因表達(dá)量是指測(cè)定卵丘細(xì)胞中基因表達(dá)量。

進(jìn)一步，所述測(cè)定基因表達(dá)量的試劑為PCR引物和探針，所述引物和探針的核苷酸序列如下：

為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種檢測(cè)人類卵母細(xì)胞質(zhì)量的定量PCR檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒含有：

1)樣本預(yù)處理試劑；

2)實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)試劑；

3)PCR引物和探針組合；

4)陰性質(zhì)控樣本；

5)陽性質(zhì)控樣本；

所述引物和探針包括7組引物和探針，共檢測(cè)7個(gè)基因的表達(dá)，所述引物和探針核苷酸序列如下：