[發明專利]一種檢測人類卵母細胞質量的定量PCR檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201710052367.1
• 申請日: 2017-01-24
• 公開（公告）號: CN106701977B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 薛志剛;童曉文;紀亞忠;劉麒薇
• 申請（專利權）人: 上海市同濟醫院
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發明涉及一種基于實時定量PCR檢測人類卵丘細胞基因表達情況，進而預測人類卵子質量的試劑盒。本發明選擇MSTN、CTGF、NDUFA1、SCD5、VCAN、STAR和GAPDH共7個基因作為檢測對象，需要進行人工授精的女性和正常女性的卵丘細胞為研究對象，通過單細胞轉錄組高通量測序，分析兩組對象間的表達譜差異，最終確定這6個基因與卵子質量具有相關性，其中GAPDH作為內參，進而研發了預測卵子質量的qPCR檢測試劑盒。本發明的試劑盒以及操作步驟能適用于現有的定量PCR工作平臺，通過多個基因表達檢測并預測卵子質量，縮短篩查時間，提高人工輔助生殖的成功率，降低治療總體費用，縮短治療周期，對減輕不孕不育人群的負擔和痛苦具有積極意義。

技術領域

本發明涉及人工授精、試管嬰兒和胚胎移植等輔助生殖技術領域，具體地說，是一種檢測人類卵母細胞質量的定量PCR檢測試劑盒。

背景技術

繁衍是人類的本能需要，孕育健康的寶寶不僅是家庭幸福的需要，也是種族延續、國家繁榮強盛的根本。2016年的統計發現，20年前我國育齡人群中不孕不育率僅為3％，而如今我國育齡人群中不孕不育率攀升到12.5％至15％，這一比例的升高，除了隨著社會進步，檢測和統計逐漸普及和完善的原因之外，飲食方式、空氣質量、水質量、食物質量、工作壓力、鍛煉因素、疾病情況等都有關系，這些因素都會對生育的重要生物基礎——卵子——的質量造成重大的影響。人類生命的自然開始必須以精子細胞和卵子細胞的相遇并結合為基礎，健康的寶寶對于不能自然受孕的人群，人工干預是一條可能選擇的道路，人工干預的方式主要有人工授精、試管嬰兒和單細胞顯微注射。選擇質量好的卵子對人工干預技術的成功具有積極的影響，卵丘細胞是卵子成熟過程的重要組成部分，我們的研究發現，可以通過測定卵丘細胞某些基因的表達來預測卵子的質量，而卵子的質量是由后續胚胎的發育情況進行衡量的，這一檢測的意義在于可以極大的減少對卵子的損傷，提高卵子授精以及成功發育的幾率，降低患者的負擔和痛苦。

發明內容

本發明的第一個目的是針對現有技術中的不足，提供測定基因表達量的試劑的新用途。

本發明的第二個目的是，提供一種檢測人類卵母細胞質量的定量PCR檢測試劑盒。

為實現上述第一個目的，本發明采取的技術方案是：

測定基因表達量的試劑在制備檢測人類卵母細胞質量或檢測卵母細胞受精后胚胎質量的試劑盒中的應用，所述基因選自如下所述基因中的任意一種或多種組合：

1)MSTN；

2)CTGF；

3)NDUFA1；

4)SCD5；

5)VCAN；

6)STAR。

進一步，所述試劑盒還包括測定GAPDH基因表達量的試劑。

進一步，所述測定基因表達量是指測定卵丘細胞中基因表達量。

進一步，所述測定基因表達量的試劑為PCR引物和探針，所述引物和探針的核苷酸序列如下：

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

一種檢測人類卵母細胞質量的定量PCR檢測試劑盒，所述試劑盒含有：

1)樣本預處理試劑；

2)實時定量PCR反應試劑；

3)PCR引物和探針組合；

4)陰性質控樣本；

5)陽性質控樣本；

所述引物和探針包括7組引物和探針，共檢測7個基因的表達，所述引物和探針核苷酸序列如下：