[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于氟固相萃取富集含半胱氨酸肽段并進(jìn)行質(zhì)譜分析的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710051523.2 | 申請(qǐng)日： | 2017-01-23 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN108344871B | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-02-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陸豪杰;張程;張瑩 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 復(fù)旦大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | G01N33/68 | 分類(lèi)號(hào)： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吳桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 氟固相 萃取 富集 半胱氨酸 進(jìn)行 譜分析 方法 | ||
1.一種基于氟固相萃取富集含半胱氨酸肽段并進(jìn)行質(zhì)譜分析的方法，其特征在于，采用氟化石墨材料為固相萃取吸附劑，實(shí)現(xiàn)蛋白酶解肽段混合物中含半胱氨酸肽段的分離富集和質(zhì)譜鑒定，其包括步驟：
（1）在含有自由巰基肽段的多肽樣品中，加入帶有碘乙酰胺反應(yīng)基團(tuán)的氟標(biāo)簽衍生試劑，在含有體積比20%-60%乙腈、25-100毫摩爾/升碳酸氫銨的水溶液中進(jìn)行氟標(biāo)簽衍生，反應(yīng)的時(shí)間為1-4小時(shí)，反應(yīng)溫度為37-60攝氏度；
（2）在含有體積比20-60%甲醇、25-100毫摩爾/升碳酸氫銨的水溶液中，加入1-4毫克氟化石墨以及氟標(biāo)簽衍生后的多肽樣品，均勻分散，共孵育5-30分鐘，結(jié)合離心分離的方法，收集下層固體；
（3）用含有體積比20-60%甲醇、25-100毫摩爾/升碳酸氫銨的水溶液清洗固體相，每次清洗后，結(jié)合離心分離的方法，收集下層固體，洗滌次數(shù)為2-3次，每次清洗的時(shí)間為5-10分鐘；
（4）用含有體積比80%-100%甲醇的水溶液再混勻固相；結(jié)合離心分離的方法，收集上層清液，進(jìn)行進(jìn)一步的質(zhì)譜分析。
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