[發(fā)明專利]一種酶法制備鄰苯酚類化合物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710051492.0
• 申請(qǐng)日: 2017-01-20
• 公開（公告）號(hào): CN106755133B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊縝;程輝;鄒永
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P7/22
• 分類號(hào): C12P7/22;C12P7/42;C12N9/02;C12N11/00
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種酶法制備鄰苯酚類化合物的方法，其特征在于：是采用無載體固定化酪氨酸酶為催化劑，以單苯酚類化合物為底物，二甲基亞砜為助溶劑，L-抗壞血酸為還原劑，在15~40℃下反應(yīng)1~7h，得到鄰苯酚類化合物；所述鄰苯酚類化合物為3'-羥基紫檀茋或白皮杉醇；

所述單苯酚類化合物的用量為溶質(zhì)總質(zhì)量的10~50%（wt.%），無載體固定化酪氨酸酶的用量為溶質(zhì)總質(zhì)量的5~50%（wt.%），L-抗壞血酸的用量為溶質(zhì)總質(zhì)量的15~80%（wt.%）；所述二甲基亞砜的用量為溶液總體積的10~50%（v/v）；

所述無載體固定化酪氨酸酶，是采用交聯(lián)酶聚集體技術(shù)制備得到，包括下述步驟：（1）蘑菇中酪氨酸酶的提取：新鮮白色雙孢菇洗凈晾干后，將雙孢菇：磷酸緩沖液按質(zhì)量體積比g/ml為1:（1~3）的比例混合，所述磷酸緩沖液為pH6.0、50mM；然后用勻漿機(jī)搗碎，過濾除去殘?jiān)螅瑢⒗野彼崦溉芤豪鋬鰞?chǔ)存；（2）無載體固定化：在室溫下將凍存的酪氨酸酶溶液解凍，加入硫酸銨至40~80%飽和度，繼續(xù)振搖，待硫酸銨全部溶解后，加入25%（wt.%）的戊二醛，使酪氨酸酶溶液中戊二醛的量達(dá)到0.15~0.35%（wt.%），在4℃下繼續(xù)攪拌12~18h，得到濁液；然后將濁液離心，去上清后加入磷酸緩沖液清洗沉淀，所述磷酸緩沖液為pH6.0、50mM，然后離心重復(fù)清洗3~5 次，至上清完全沒有酶活即把未固定化的酪氨酸酶洗掉為止；再將沉淀冷凍干燥12~18h至重量不再減少為止，得到無載體固定化酪氨酸酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備鄰苯酚類化合物的方法，其特征在于：當(dāng)采用無載體固定化酪氨酸酶制備3'-羥基紫檀茋時(shí)，底物紫檀茋的用量為15~45%（wt.%），還原劑L-抗壞血酸的用量為15~55%（wt.%），無載體固定化酪氨酸酶的用量為5~40%（wt.%），反應(yīng)的溫度為15~40℃，反應(yīng)時(shí)間1~7h，合成3'-羥基紫檀茋；生成的3'-羥基紫檀茋會(huì)被氧化成相應(yīng)的醌，再進(jìn)一步用L-抗壞血酸將醌還原為3'-羥基紫檀茋。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶法制備鄰苯酚類化合物的方法，其特征在于：底物紫檀茋的用量為30%（wt.%），無載體固定化酪氨酸酶的用量為29%（wt.%），還原劑L-抗壞血酸的用量為41%（wt.%），溫度為25℃，反應(yīng)時(shí)間為4h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備鄰苯酚類化合物的方法，其特征在于：用無載體固定化酪氨酸酶制備白皮杉醇時(shí)，底物白藜蘆醇的用量為15~45%（wt.%），二甲基亞砜的用量為20~50%（v/v），無載體固定化酪氨酸酶的用量為5~40%（wt.%）， L-抗壞血酸的用量為15~55%（wt.%），反應(yīng)溫度為15~40℃下，反應(yīng)時(shí)間為1~7h，合成白皮杉醇；生成的白皮杉醇會(huì)被氧化成相應(yīng)的醌，再進(jìn)一步用L-抗壞血酸將醌還原為白皮杉醇。