[發明專利]通過高效液相色譜檢測甘氨酸及其雜質的方法

在審

• 申請號: 201710050705.8
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106596799A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 龔文照;韋萍;喬浩;徐濤;張偉;袁秋華;于榮華;郭琳;王佳臻
• 申請（專利權）人: 陽泉煤業（集團）有限責任公司;南京工業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京市躍揚知識產權代理事務所(普通合伙)11559
• 代理人: 葉平

技術領域

本發明涉及有機分析技術領域，具體涉及一種通過高效液相色譜檢測甘氨酸及其雜質的方法。

背景技術

甘氨酸是是氨基酸系列20個成員中結構最簡單的一個，又稱氨基醋酸，為人體必需的一種氨基酸，在分子中同時具有酸性和堿性官能團，在水溶液中為強電解質。甘氨酸在強極性溶劑中溶解度較大，基本不溶于非極性溶劑，而且具有較高的沸點和熔點，通過水溶液酸堿性的調節可以使甘氨酸呈現不同的分子形態。

由于甘氨酸的側鍵是一個氫原子，它可以占據其它氨基酸無法占據的空間，比如作為膠原螺旋內的氨基酸。常溫下，氨基酸為白色晶體或淺黃色結晶性粉末，并且有獨特的甜味，能緩和酸、堿味、掩蓋食品中添加糖精的苦味并增強甜味。甘氨酸的合成工藝較多，主要有氯乙酸氨解法、施特雷克法和海因法三種，三種方法中合成甘氨酸母液成分復雜，因此給準確檢測母液中甘氨酸的含量帶來一定的難度。

現有技術中，已經公開了多種氨基酸的分析方法，例如液相色譜法、氨基酸分析儀法、光度法、甲醛滴定法和凱氏定氮法。其中，液相色譜法一般使用柱前衍生化的方案，即將甘氨酸先衍生化，然后使反應物在分析柱上實現分離進行檢測，間接反應甘氨酸的含量。雖然柱前衍生可以相對自由地選擇反應條件，不存在反應動力學的限制；而且，衍生化的副產物可進行預處理以降低或消除干擾，容易允許多步反應的進行，有較多的衍生化試劑可選擇，不需要復雜的儀器設備。但是，衍生化形成的副產物可能對色譜分離造成較大困難，而且衍生化的過程中容易引入雜質或干擾峰，使樣品損失。此外，衍生試劑昂貴，操作復雜，對于測定一種氨基酸不適用。

凱氏定氮法最大的優點是準確度高，但由于試劑消耗量大，并且測定周期長，而且要求樣品中不能含有其它氮化物，否則反而容易導致結果的不準確。

綜上，需要一種操作簡便、并且能夠測定組分復雜的甘氨酸的檢測方法。

發明內容

針對現有技術的不足，需要提供一種操作簡便、并且能夠測定組分復雜的甘氨酸的檢測方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種通過高效液相色譜檢測甘氨酸及其雜質的方法，包括：

使用體積比80-99％的乙腈和1-20％的水為第一流動相；

使用體積為80-99％的濃度為5-30mmol/L的磷酸二氫鉀溶液和1-10％的甲醇為第二流動相；

在C18為色譜柱的液相色譜儀中測定甘氨酸。

優選的，所述測定甘氨酸時的液相色譜儀的柱溫設置為20-50℃。

優選的，所述測定甘氨酸時的液相色譜儀的波長設置為為200-260nm。

優選的，所述測定甘氨酸是的液相色譜儀的進樣量設置為5-15μL。

優選的，所述第一流動相的乙腈體積含量與水的體積含量比為85-95％：5-15％。

優選的，所述第二流動相磷酸二氫鉀溶液和甲醇體積比為90-96％：4-10％。

優選的，所述測定甘氨酸時的液相色譜儀的柱溫設置為25℃。

優選的，所述第二流動相需要調整pH值小于3.0。

優選的，所述第二流動相使用磷酸調整pH值小于3.0。

優選的，所述第二流動相使用pH值調整到pH值為2.0。

本發明公開一種通過高效液相色譜檢測甘氨酸及其雜質的方法，包括：使用體積比80-99％的乙腈和1-20％的水為第一流動相；使用體積為80-99％的濃度為5-30mmol/L的磷酸二氫鉀溶液和1-10％的甲醇為第二流動相；在C18為色譜柱的液相色譜儀中測定甘氨酸。相比于現有技術，本發明所涉及的利用高效液相色譜檢測合成甘氨酸母液中的甘氨酸及雜質的方法。該檢測方法能有效地分離甘氨酸的雜質，特別是實現了對海因(雜質A)、海因酸(雜質B)和二甘氨酰甘氨酸(雜質C)的高效分離。該方法分離度高、重現性好，對于合成甘氨酸的過程檢測和質量保證具有重要的現實意義。

附圖說明

圖1是按照傳統方法測定含有雜質的甘氨酸高效液相色譜圖；

圖2是本發明檢測的高純甘氨酸的高效液相色譜圖；

圖3是本發明檢測的含有雜質的甘氨酸高效液相色譜圖。

具體實施方式

本發明提供一種通過高效液相色譜檢測甘氨酸及其雜質的方法，包括：

使用體積比80-99％的乙腈和1-20％的水為第一流動相；

使用體積為80-99％的濃度為5-30mmol/L的磷酸二氫鉀溶液和1-10％的甲醇為第二流動相；

在C18為色譜柱的液相色譜儀中測定甘氨酸。