[發(fā)明專利]HLA-A2限制性ECM1特異性的CTL表位肽及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710050501.4
• 申請日: 2017-01-23
• 公開（公告）號: CN106589105B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏敏杰;于兆進(jìn);孫明立;劉雯思;韓強(qiáng);趙蘭;李亞楠;線云開
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標(biāo)代理有限公司 21107
• 代理人: 史力伏

本發(fā)明涉及腫瘤的免疫治療領(lǐng)域，尤其涉及HLA?A2限制性ECM1特異性的CTL表位肽及其應(yīng)用，特別涉及通過腫瘤疫苗特異性誘導(dǎo)、刺激活化生物體腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞，激發(fā)、增強(qiáng)生物體抗腫瘤免疫功能及其在特異性抗腫瘤免疫治療中的應(yīng)用方案。其氨基酸序列如下SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：5；表位肽為系列短肽，體外容易合成，能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生顯著抗腫瘤免疫反應(yīng)，具有非常大的商業(yè)產(chǎn)業(yè)化價(jià)值等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于腫瘤免疫治療技術(shù)領(lǐng)域中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腫瘤的免疫治療領(lǐng)域，尤其涉及HLA-A2限制性ECM1特異性的CTL表位肽及其應(yīng)用，特別涉及通過腫瘤疫苗特異性誘導(dǎo)、刺激活化生物體腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞，激發(fā)、增強(qiáng)生物體抗腫瘤免疫功能及其在特異性抗腫瘤免疫治療中的應(yīng)用方案。

背景技術(shù)

細(xì)胞外基質(zhì)蛋白-1（ECM1）是1994年Mathieu等從鼠的成骨基質(zhì)細(xì)胞株MN7中分離出來的一種分泌型糖蛋白，相對分子質(zhì)量為85KD。ECM1蛋白質(zhì)參與多種生物學(xué)過程，包括細(xì)胞增殖，血管生成，胚胎軟骨的形成，皮膚分化等。近年來研究表明，ECM1在乳腺癌、甲狀腺癌、喉癌、肝癌、膽管癌、胃癌、結(jié)直腸癌、肺癌等多種上皮樣惡性腫瘤中高表達(dá)，因此，ECM1可作為腫瘤相關(guān)抗原成為腫瘤免疫治療靶點(diǎn)。

近年來，隨著對免疫應(yīng)答分子機(jī)制研究的深入，現(xiàn)已逐漸認(rèn)識到機(jī)體的免疫細(xì)胞并不是對應(yīng)于各種各樣的病原體或天然抗原的整體分子，而是針對各種各樣抗原分子的抗原表位，即蛋白質(zhì)抗原是通過其表位來體現(xiàn)其免疫特異性。目前的研究表明，CD8+T細(xì)胞所識別的靶抗原需先經(jīng)抗原提呈細(xì)胞處理，之后以“抗原肽-MHC-I類分子”復(fù)合物的形式呈現(xiàn)在抗原提呈細(xì)胞或靶細(xì)胞表面，相應(yīng)的與MHC-I類分子結(jié)合的抗原肽即為CTL表位。表位肽能夠激活誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL細(xì)胞），可對人類白細(xì)胞抗原（HLA）配型匹配的腫瘤有一定的殺傷效果。中國人群中MHC-I類最常見的亞型型為HLA-A2。因此，篩選HLA-A2限定性且可識別ECM1的CTL表位，可實(shí)現(xiàn)針對ECM1陽性表達(dá)且HLA配型匹配的惡性上皮腫瘤的靶向免疫治療。

合成肽疫苗是近年來出現(xiàn)的新型疫苗研究方向，合成肽能夠直接與MHC分子結(jié)合，而不需要APC的加工處理，它與天然的內(nèi)源性肽在激活免疫系統(tǒng)方面具有相同的效果，因此合成肽疫苗廣泛應(yīng)用于抗病毒免疫治療。目前已有多種基于多肽表位的合成肽疫苗進(jìn)入臨床研究階段或已上市。建立在CTL表位鑒定基礎(chǔ)之上的CTL表位肽疫苗，由于人工合成多肽不包含病原生物的無關(guān)成分，只誘導(dǎo)特異性CTL應(yīng)答，因此安全、穩(wěn)定、毒副作用少，且研制周期大大縮短。更重要的是，基于CTL表位研發(fā)的多個(gè)CTL表位組合，還可設(shè)計(jì)針對一種或多種病原體的多價(jià)CTL表位肽疫苗。因此CTL表位合成肽疫苗已成為治療腫瘤研究的一個(gè)新策略，而對HLA-A2限制性ECM1特異的CTL 表位肽即成為研究的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種HLA-A2限制性ECM1特異性的CTL表位肽，該發(fā)明是對與人HLA-A2分子結(jié)合的多肽分子進(jìn)行預(yù)測、篩選和鑒定，提供能與人HLA-A2分子的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行結(jié)合、可激活ECM1特異性的CTL細(xì)胞的表位肽。本發(fā)明提供的HLA-A2限制性ECM1特異的CTL表位肽可用于研制靶向抗原ECM1的治療性肽疫苗，為上皮樣惡性腫瘤精準(zhǔn)免疫治療提供理論基礎(chǔ)。

本發(fā)明提供了HLA-A2限制性ECM1特異的CTL表位肽能與人HLA-A2分子的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行結(jié)合，可誘導(dǎo)產(chǎn)生ECM1特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮HLA-A2限制性腫瘤殺傷作用的表位肽，其氨基酸序列選自。

SEQ ID NO ：1 EEP1：Leu Val Leu Thr Tyr Leu Ala Val Ala。

SEQ ID NO ：2 EEP2：Tyr Ala Ala Pro Pro Ser Pro Pro Leu。

SEQ ID NO ：3 EEP 3：Leu Gln Gln Glu Lys Leu Leu Pro Ala。