[發(fā)明專利]一種用于富含脂滴組織快速完全透明化的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710049563.3
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106769350B
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發(fā)明（設計）人: 李小衛(wèi);邵志峰;賴夢婕;李俊;丹尼爾·恰科夫
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N21/64
• 代理公司: 31266 上海一平知識產權代理有限公司
• 代理人: 崔佳佳;陸鳳<國際申請>=<國際公布>=

本發(fā)明涉及一種用于富含脂滴組織快速完全透明化的方法，具體地，本發(fā)明的方法包括以下步驟：提供一水凝膠固定處理后的富含脂滴的組織樣品；對所述的組織樣品進行透明化預處理，得到預處理樣品；對所述的預處理樣品進行透明化處理，得到透明化樣品；以及對所述的透明化樣品進行透明化后處理，得到透明化終樣品。本發(fā)明的方法不會對生物組織的精細結構造成破壞，并且可以顯著提高生物組織的光學成像的深度。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，具體地，本發(fā)明涉及一種用于富含脂滴組織快速完全透明化的方法，所述的方法可以實現(xiàn)對所有器官和組織，包括整個動物身體的完整透明化，從而獲得三維高分辨率結構信息。

背景技術

研究生物醫(yī)學組織在細胞和亞細胞尺度的三維空間結構，是理解其正常功能機制的基礎，也能為掌握器官疾病的發(fā)生和發(fā)展過程提供基礎依據。以前對人和其它動物組織的研究主要為解剖學尺度的研究，而在細胞和亞細胞尺度的研究則受限于解析能力的限制，通常只能研究組織切片的二維結構信息。基于組織連續(xù)切片的三維重構技術研究組織則非常耗時和費力。近年來組織透明化技術的迅猛發(fā)展使人們獲得完整生物組織和器官的高分辨率三維結構成為可能。斯坦福大學Deisseroth教授實驗室發(fā)明的CLARITY技術最早應用于腦組織的透明化和三維結構研究，并逐步拓展到其它主要器官，如腎臟，小腸等，展示了這種技術在獲取生物組織完整三維高分辨率結構信息方面的巨大潛在價值。

然而，將CLARITY技術拓展到所有器官的透明化時，發(fā)現(xiàn)有些器官即使用表面活性劑進行很長的時間的處理，也很難被完全的透明化，從而大大限制了三維結構研究所能到達的組織深度。這些很難被完全透明的組織主要包括脂肪組織，肝臟組織和肌肉組織等。這些組織的一個共同特點是它們的組織中都富含脂滴。由于這些脂滴的高度疏水性和致密性，CLARITY技術中用來去脂的方法很難將其從組織中去除。這些致密的脂滴的折射率通常高于周圍的其它分子，折射率的不匹配會引起光子的散射增加，從而降低組織的透明度和光學成像的深度。

因此，本領域迫切需要一種快速、有效的用于富含脂滴組織透明化的方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種快速有效地使富含脂滴組織透明化的處理方法和相應的試劑盒。

本發(fā)明的第一方面提供了一種用于富含脂滴組織快速完全透明化的方法，所述的方法包括以下步驟：

(i)提供一水凝膠固定處理后的富含脂滴的組織樣品；

(ii)對所述的組織樣品進行透明化預處理，得到預處理樣品；

(iii)對所述的預處理樣品進行透明化處理，得到透明化樣品；和

(iv)對所述的透明化樣品進行透明化后處理，得到透明化終樣品。

在另一優(yōu)選例中，還包括步驟：

(v)對所述的透明化終樣品進行染色和封片處理，得到測試樣品。

在另一優(yōu)選例中，所述的富含脂滴的組織包括：肝臟組織、脂肪組織和骨骼肌組織。

在另一優(yōu)選例中，所述的富含脂滴的組織為切片形式。

在另一優(yōu)選例中，所述的富含脂滴的組織為厚度0.5-1mm的切片。

在另一優(yōu)選例中，所述的透明化預處理為使用表面活性劑溶液清洗所述的富含脂滴的組織樣品。

在另一優(yōu)選例中，所述的表面活性劑選自下組：十二烷基硫酸鈉(SDS)、Triton X-100、或其組合，較佳地，所述的表面活性劑為SDS。

在另一優(yōu)選例中，所述的SDS濃度為4％-8％。

在另一優(yōu)選例中，所述的表面活性劑清洗所述的富含脂滴的組織樣品的時間為7-11天。