[發明專利]一種快速高效檢測菌落總數的測試片及其制備方法

在審

• 申請號: 201710047353.0
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106854620A
• 公開（公告）日: 2017-06-16
• 發明（設計）人: 何方洋;扶勝;馮才偉;周繪;萬宇平;張鶴;付浩;席蕓蕓;湛劍龍;侯璐偉;王吉平;金邦明;朱亮;馮月君
• 申請（專利權）人: 貴州勤邦食品安全科學技術有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/06
• 代理公司: 江蘇愛信律師事務所32241
• 代理人: 趙贊贊

技術領域

本發明屬于快速檢測領域，涉及微生物檢測技術，具體涉及一種快速高效檢測菌落總數的測試片，以及該測試片制備方法。

背景技術

細菌廣泛存在于空氣、水和土壤中，絕大部分對人體無害，但有些細菌對人體有害，細菌過多可引起食物質變，會刺激人體消化道、胃部等，嚴重的還可對肝臟造成損傷，造成食物中毒，危及生命安全。目前對細菌菌落總數測定主要采用《GB 4789.2-2010食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定》，該方法為平板計數法，是經典的菌落總數檢測方法。但國標法檢測在實際計數過程中，由于菌落顏色與瓊脂底色相近，部分細小或生長于瓊脂內部的菌落難以準確讀出，此外，如果檢驗樣品中含有殘渣微粒，特別一些較難溶食品如糕點等，與細菌菌落難以區分，會嚴重影響細菌計數的準確性，并且國標方法檢測耗時長、需要現配置培養基，操作步驟繁瑣，難以滿足快檢的實際需求。

紙片法的出現，彌補了平板計數法的缺點，逐步成為微生物檢測和鑒定的主要方法和標準，2007年，Petrifilm^TM測試片被正式列為中國出入境檢驗檢疫行業標準，該方法正逐漸被越來越多的食品生產加工企業及各類檢測機構所認可。公開日為2016年07月13日，公開號為CN105754849A，名稱為一種菌落總數測試片、制備方法及其應用的發明專利，公開日為2013年03月20日，公開號為CN102985554A，名稱為快速檢測微生物的裝置的發明專利均公開了一種測試片，將顯色底物液TTC添加至細菌培養基中，由于顯色底物TTC對菌落生長有一定的抑制作用，會使微生物生長緩慢或停止生長，具有影響菌落計數和導致實驗結果判讀困難的缺陷，對檢測結果會造成一定影響。

發明內容

為了解決上述現有技術存在的問題，本發明提供了一種快速高效檢測菌落總數的測試片及其制備方法，簡化和加快了菌落總數的檢測鑒定步驟，降低了指示劑對菌落總數的抑制作用，提高了對微生物的檢測效率，獲得的檢測結果準確可靠。

技術方案：

一種快速高效檢測菌落總數的測試片，包括上層塑料膜(1)和下層塑料底板(3)，下層塑料底板(3)中間有圓形凹槽(2)，所述上層塑料膜(1)內側依次為TTC與膠粘劑混合物涂層(1-2)和瓜爾膠涂層(1-3)，所述混合物由濃度為0.8％的TTC溶液與膠粘劑按體積比0.1～1.0:10.0混合而成，涂布量0.1～1.0mL/片，所述瓜爾膠涂層(1-3)涂布量0.1～1.0g/片，所述圓形凹槽(2)內置細菌菌落生長培養基，每100mL細菌菌落生長培養基中含有胰蛋白胨0.5～1.0g、酵母粉0.1～0.5g、葡萄糖0.1～0.5g、磷酸二氫鉀0.1～0.5g、氯化鈉0.1～0.5g、丙酮酸鈉0.1～0.5g、甘露醇0.1～0.5g、瓜爾膠1g。

進一步膠粘劑為壓敏粘合劑。

進一步上層塑料膜1為透明膜，為聚酯、聚乙烯、聚丙烯或聚苯乙烯材料，長×寬×厚為100×70×0.1mm。

進一步下層塑料底板3為聚丙烯塑料板或PET塑料板，長×寬×厚為95×70×0.7mm，中間的圓形凹槽2直徑為70mm，厚度為0.5mm。

本發明另一個目的還提供了一種快速高效檢測菌落總數的測試片的制備方法，其主要包括以下步驟：

a.測試片上層塑料膜1與下層塑料底板3在制備前需經過輻照滅菌進行處理，輻照劑量16KGy；

b.測試片上層塑料膜1的制備：將0.8％TTC與膠粘劑按體積比0.1～1.0：10的比例混合，115℃滅菌15min，冷卻至室溫，均勻的涂布在上層塑料膜(1-1)上，涂布量0.1～1.0mL/片，然后再涂布經劑量為8KGy輻照后的瓜爾膠0.1～1.0g/片，一端留出5mm的寬度不涂抹瓜爾膠，得到；

c.測試片下層塑料底板3的制備：配制細菌菌落生長培養基，取100mL蒸餾水，按照以下配方加入：胰蛋白胨0.5～1.0g、酵母粉0.1～0.5g、葡萄糖0.1～0.5g、磷酸二氫鉀0.1～0.5g、氯化鈉0.1～0.5g、丙酮酸鈉0.1～0.5g、甘露醇0.1～0.5g、瓜爾膠1g，加熱溶解后，采用高壓滅菌鍋在121℃滅菌15min，冷卻至室溫后，得到細菌菌落生長培養基，將1～5mL細菌菌落生長培養基添加到下層塑料底板3中間的圓形凹槽2內，搖勻，于50～60℃烘干；

d.組裝測試片：將步驟b中所制測試片上層塑料膜1，未涂抹瓜爾膠的一端與步驟c中制備的測試片下層塑料底板3一端對齊后粘貼在一起制得快速高效檢測菌落總數的測試片。

有益效果：