[發明專利]一種高靈敏度膠體金試紙及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201710046695.0
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106872690B
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 周軍;王健斌;龔貽洲;曾生
• 申請（專利權）人: 武漢璟泓萬方堂醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 武漢河山金堂專利事務所(普通合伙) 42212
• 代理人: 胡清堂

本發明公開了一種高靈敏度膠體金試紙及其制備方法與應用，所提供的高靈敏度膠體金試紙，包括底板、樣本墊、結合物墊、NC膜、吸收墊，所述結合物墊為含有金標生物素化抗體的結合物墊；所述樣本墊為含有親和素的樣本墊。高靈敏度膠體金試紙適用于各種抗體/抗原的檢測，靈敏度高，假陽性率低，相對于傳統的膠體金試紙，其檢測靈敏度提高了100倍，且制備方法簡單，實用性好，具有較好的市場前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地指一種高靈敏度膠體金試紙及其制備方法與應用。

背景技術

膠體金是一種常用的標記技術，是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，有其獨特的優點。近年已在各種生物學研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術幾乎都使用其標記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學以至生物芯片中都可能例用到。

為了提高膠體金檢測的靈敏度，研究者采用了各種各樣的方法，其中就包括了生物素－親合素系統(Biotin-Avidin—System，BAS)，它是70年代末發展起來的一種新型生物反應放大系統。隨著各種生物素衍生物的問世，BAS很快被廣泛應用于醫學各領域。近年大量研究證實，生物素—親合素系統幾乎可與目前研究成功的各種標記物結合。生物素與親和素之間高親合力的牢固結合以及多級放大效應，使BAS免疫標記和有關示蹤分析更加靈敏。它已成為目前廣泛用于微量抗原、抗體定性、定量檢測及定位觀察研究的新技術。

現有技術公開了一種檢測甲流抗原的膠體金免疫層析試紙條，采用了生物素標記的金納米顆粒以及鏈霉親和素和甲流抗體標記的金納米顆粒作為增強探針，進行信號放大，提高了檢測甲流抗原的靈敏度。但是該方法在實際操作中可能存在假陽性問題，原因在于其鏈霉親和素-金-抗體結合物的制備過程為將抗體與親和素直接加入到膠體金溶液中進行標記，此標記過程將兩種物質同時加入到膠體金進行標記存在一定的技術漏洞，因為不同的物質標記條件是存在一定差異的，該方法的標記方法會產生親和素-金、抗體-金以及親和素-金-抗體三種物質，且由于采用的是同一標記條件，因此存在上述標記物中的復合物不穩定，在試紙保存或使用過程中容易出現標記物與金顆粒脫落的情況，從而導致試紙中存在游離的膠體金顆粒，游離的膠體金在檢測中會與試紙條NC膜上的檢測抗體直接發生反應，因此存在假陽性風險。

發明內容

本發明的目的在于克服上述生物素-親合素系統用于膠體金檢測試紙中可能存在的假陽性問題，提供了一種高靈敏度，低假陽性率的高靈敏度膠體金試紙及其制備方法與應用。

為實現上述目的，本發明所提供的高靈敏度膠體金試紙，包括底板、樣本墊、結合物墊、NC膜、吸收墊，所述結合物墊為含有金標生物素化抗體的結合物墊；所述樣本墊為含有親和素的樣本墊。

上述技術方案中，所述樣本墊是經過添加有親和素的樣本墊處理液處理所得。

上述技術方案中，所述樣本墊處理液中親和素含量為1～3μg/ml。

上述技術方案中，所述樣本墊、結合物墊、NC膜和吸收墊依次相互搭接地貼在底板上。

本發明還提供了上述高靈敏度膠體金試紙的制備方法，包括如下步驟：

(1)膠體金溶液的制備；

(2)抗體通過前預處理去除雜質、調整其pH值；

(3)將抗體的生物素化得到生物素化抗體；

(4)利用膠體金溶液標記生物素化抗體得到金標生物素化抗體；

(5)將金標生物素化抗體添加至結合物墊中；

(6)將親和素添加至樣本墊中；

(7)在NC膜上包被檢測線和質控線；

(8)將結合物墊、樣本墊、NC膜及其他制作試紙的組件組裝、切條制得高靈敏度膠體金試紙。