[發明專利]表達血清Ⅰ型馬立克氏病病毒GB基因的重組火雞皰疹病毒的構建及其應用

在審

• 申請號: 201710046543.0
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN106701693A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 畢建敏
• 申請（專利權）人: 北京邦卓生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/245;A61P31/22;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙)11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種表達血清Ⅰ型馬立克氏病病毒GB基因的重組火雞皰疹病毒的構建及其應用。動物生物制品學領域，

背景技術

雞馬立克氏病(Marek’s disease,MD)，是由雞馬立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)引起的一種雞馬立克氏病(Marek`s Disease，MD)是由雞皰疹病毒引起雞的一種最常見的淋巴細胞增生性疾病，以外周神經、虹膜、皮膚、肌肉和各內臟器官的淋巴樣細胞浸潤、增生和腫瘤形成為特征。

本病早在1907年由匈牙利的獸醫病理學家馬立克首先發現，并在1961年命名為馬立克氏病。現在世界各主要養雞國家和地區均有流行，在我國也是經濟意義上最重要的禽病之一，對我國養雞生產造成嚴重威脅和巨大的經濟損失。

馬立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)屬于細胞結合性皰疹病毒B群。病毒有兩種存在形式，即裸體粒子(核衣殼)和有囊膜的完整病毒粒子。前者病毒核衣殼呈六角形，直徑為85～100nm，有嚴格的細胞結合性，離開細胞致病性即顯著下降和喪失，在外界環境中生存活力很低，主要見于腎小管、法氏囊、神經組織和腫瘤組織中。大多數裸體病毒粒子存在于細胞核中，偶見于細胞漿或細胞外液中。后者主要存在于細胞核膜附近或者核空泡中，直徑130～170nm，主要見于羽毛囊角化層中，多數是有囊膜的完整病毒粒子，非細胞結合性，可脫離細胞而存在，對外界環境抵抗力強，在本病的傳播方面起重要作用。

1975年Bulow和Biggs采用間接免疫熒光試驗、瓊脂凝膠免疫沉淀反應及病毒中和試驗，把MDV和相關病毒(HVT)分為三種血清型，隨后這種分類方法由Lee所建立的MDV型特異性單克隆抗體所證實。

根據MDV的三種血清型，目前商品化MDV疫苗分為致弱的Ⅰ型CVI988/Rispens株、無致病性的Ⅱ型SB1株和Ⅲ型火雞皰疹病毒(Herpesvirus of turkey，HVT)FC126株。致弱的Ⅰ型CVI988/Rispens株對MD保護效果好，但其作為嚴格的細胞結合型病毒，必須液氮保存運輸，極大的增加了疫苗成本。HVT可以凍干保存，節約了疫苗成本，但其對MD的保護力較弱，因此提高HVT的免疫效力十分必要。Ross將血清Ⅰ型MDV的GB基因插入到HVT基因組的TK基因，但構建的重組病毒在體內的增殖能力變弱。(Ross LJ,Binns MM,Tyers P,Pastorek J,Zelnik V,Scott S:Construction and properties of a turkey herpesvirus recombinant expressing the Marek's disease virus homologue of glycoprotein B of herpes simplex virus.The Journal of general virology 1993,74(Pt3):371-377.)，而疫苗毒的增殖能力又和保護力緊密相關(Gimeno IM,Witter RL,Hunt HD,Reddy SM,Reed WM:Biocharacteristics shared by highly protective vaccines against Marek's disease.Avian Pathol2004,33(1):59-68.)。因此，構建正常增殖且具有更高保護力的HVT非常有必要。

疫苗是防制畜禽疾病的重要手段之一，目前大多重要的家禽傳染病都可用相應的疫苗作有效的預防。為了進一步降低生產成本，提高產品質量，禽用新型疫苗的研究迫在眉睫。隨著分子生物學技術的日臻完善，以改造病毒核酸結構為手段的疫苗，如基因缺失株疫苗、插入突變株、病毒活載體疫苗等得到了極大的發展，其中病毒活載體疫苗以生產使用方便，價格低廉，且安全性、穩定性及免疫力較強等方面優勢，成為研究的熱點。相對于其它病毒載體(如禽痘病毒、禽腺病毒、新城疫病毒等)，雞馬立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)作為最有潛力的疫苗載體，其突出的優點體現在：MDV是嚴格的細胞結合型病毒，構建的載體疫苗不受母源抗體的干擾，克服了眾多活病毒載體疫苗的缺陷；MDV分子大小為180kb左右，能夠容納較大片段基因的插入，而不影響重組病毒的穩定性；MDV疫苗適合早期免疫，對多數病毒特別是免疫抑制性病毒疫苗的研發帶來了曙光。基于HVT構建病毒活載體疫苗不僅具有上述優點，還可以實現一苗兩防、一苗多防，具有廣闊的市場前景。

發明內容