[發(fā)明專利]一種提高枯草芽孢桿菌腈水合酶活性的發(fā)酵培養(yǎng)基及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710043877.2
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN106701725A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉善和;吳海峽;趙廣福;韓道平;孔軍軍;邢建生
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽瑞邦生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 馬鞍山市金橋?qū)＠碛邢薰?4111
• 代理人: 魯延生

1.一種提高枯草芽孢桿菌腈水合酶活性的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，該發(fā)酵培養(yǎng)基成分為：葡萄糖1～5g/v％、誘導(dǎo)劑IND 0.5～5ml/L、KH₂PO₄ 0.01～1g/v％、K₂HPO₄·3H₂O 0.01～1g/v％、MgSO₄·7H₂O 0.01～0.05g/v％、谷氨酸0.05～1g/v％、脲0.01～1g/v％、NH₄Cl 0.1～1g/v％、酵母浸粉0.1～1g/v％、Tween-80 0.1～1g/v％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高枯草芽孢桿菌腈水合酶活性的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的葡萄糖濃度為100～500g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高枯草芽孢桿菌腈水合酶活性的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，所述的誘導(dǎo)劑IND濃度為5～20ml/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高枯草芽孢桿菌腈水合酶活性的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于，發(fā)酵培養(yǎng)基成分為：葡萄糖5g/v％、誘導(dǎo)劑IND 5ml/L、KH₂PO₄ 0.4g/v％、K₂HPO₄·3H₂O 0.2g/v％、MgSO₄·7H₂O 0.05g/v％、谷氨酸0.8g/v％、尿素0.6g/v％、NH₄Cl 0.5g/v％、酵母浸粉0.5g/v％、Tween-80 0.5g/v％，pH控制為6.8～7.5，121℃滅菌10-30min。

5.一種提高枯草芽孢桿菌腈水合酶活性的發(fā)酵培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于，該培養(yǎng)基用于枯草芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)，在5L發(fā)酵罐中加入2～4L如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，121℃實(shí)罐消毒10～30min，以5～15％的接種量將200～400ml種子液轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)，在通氣量1～3vvm、罐壓0.01～0.1Mpa、攪拌轉(zhuǎn)速100～300rpm、溫度25～35℃的條件下，發(fā)酵周期72～120h左右；培養(yǎng)過程中，每隔2～5h取樣，測定菌體生長量、發(fā)酵液pH變化、葡萄糖含量以及酶活變化情況；控制pH值在6.8～7.5，通過補(bǔ)加葡萄糖-Co²⁺耦合溶液使其濃度保持在3～5g/L之間，當(dāng)酶活出現(xiàn)降低時(shí)結(jié)束培養(yǎng)，收獲菌體待用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種提高枯草芽孢桿菌腈水合酶活性的發(fā)酵培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于，在發(fā)酵培養(yǎng)過程中采用葡萄糖-Co²⁺耦合補(bǔ)加工藝，添加葡萄糖和誘導(dǎo)劑IND二者配成的補(bǔ)料。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種提高枯草芽孢桿菌腈水合酶活性的發(fā)酵培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于，在發(fā)酵過程中需要控制細(xì)菌生長環(huán)境：通過添加氨水將pH控制在6.8～7.5，溫度控制在25～35℃，通氧量保持1～3vvm。