[發明專利]利用生物反應器進行多肉植物繁殖的方法

有效

• 申請號: 201710043463.X
• 申請日: 2017-01-19
• 公開（公告）號: CN106718931B
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 李玲莉;鄒世慧;李卿;湯麗紅;孔立生
• 申請（專利權）人: 重慶市風景園林科學研究院;重慶千春詞生態農業發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 重慶信航知識產權代理有限公司 50218
• 代理人: 鐘繼蓮

本發明公開了一種利用生物反應器進行多肉植物繁殖的方法，包括如下步驟：(1)外植體滅菌及誘導：取外植體消毒滅菌后接種于誘導培養基中，誘導產生胚性愈傷組織；(2)生物反應器增殖：將胚性愈傷組織接種于添加有液體增殖培養基的生物反應器中，暗光培養2～4個周期，獲得大量胚性材料；(3)干燥與萌發：將胚性材料置于無菌條件下，經干燥、脫水后，置于無菌干燥瓶中繼續培養1?2個月；然后接種于萌發培養基中，形成正常叢生芽；(4)壯苗與移栽：將正常叢生芽接種于壯苗培養基中，培養成可移栽的叢生苗，進行移栽即可。采用本發明步驟進行多肉植物的繁殖，可有效地避免多肉植物組織培養過程中常見的玻璃化和生長速度緩慢等問題。

技術領域

本發明涉及植物擴繁技術領域，具體涉及一種利用生物反應器進行多肉植物繁殖的方法。

背景技術

多肉植物又稱多漿植物、肉質植物，是指在植物營養器官中至少有一器官具有發達的薄壁組織以儲藏水分，外型比一般植物顯得肥厚、膨大和多汁。2012年根據瑞士國際多肉植物協會專家的統計，多肉植物隸屬于83科、690屬，約12500種。我國常見栽培的有60余科，逾萬種。多肉植物最早風靡于日本、韓國等東亞國家，目前在這些國家已經形成了完整的、較成熟的培育篩選產業。近年來，國內多肉植物市場還在持續不斷升溫，但在多肉植物的科研領域還處于初級階段，大部分集中在引種馴化階段，也有人開始了組培、育種等方面的研究。北京、上海、廈門、天津等地的一些植物園和經營者在多肉植物的科研方面走在了前列，尚未形成技術優勢，無法與國外的多肉產品相抗衡。目前，雖然有部分企業陸續開始通過組織培養途徑開展多肉植物的快速繁殖，但是受困于多肉植物材料易玻璃化和生長速度緩慢等技術難題，無法建立組織培養體系。

發明內容

針對現有技術中的上述不足，本發明提供一種利用生物反應器進行多肉植物繁殖的方法，有效地避免了多肉植物組織培養過程中常見的玻璃化和生長速度緩慢等問題。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

利用生物反應器進行多肉植物繁殖的方法，包括如下步驟：

（1）外植體滅菌及誘導

取外植體消毒滅菌后接種于誘導培養基中，誘導產生胚性愈傷組織，該胚性愈傷組織多為玻璃化狀態；

其中，誘導培養基的組成為：MS培養基+BA 0.5~2mg·L^-1+瓊脂7g·L^-1+蔗糖30g·L^-1，PH值為5.8；

（2）生物反應器增殖

將誘導產生的胚性愈傷組織接種于添加有液體增殖培養基的生物反應器中，暗光培養2~4個周期，獲得大量胚性材料；

其中，暗光培養2個周期，獲得大量嫩綠色胚性材料，該嫩綠色胚性材料有較明顯的枝葉結構；或

暗光培養3~4個周期，獲得大量無色透亮胚性材料，該無色透亮胚性材料枝葉膨大成團狀；

其中，液體增殖培養基的組成為：MS培養基+BA 0.5~2mg·L^-1+NAA 0~0.5mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1，PH值為5.8；

（3）干燥與萌發

將步驟（2）獲得的嫩綠色胚性材料置于無菌條件下，用干燥、無菌氣流脫水4-8h，然后置于光照條件下，于無菌干燥瓶中繼續脫水培養1-2個月；當脫水培養的胚性材料略顯萎蔫時，將其接種于萌發培養基中，1-2個月后形成正常叢生芽；或

將步驟（2）獲得的無色透亮胚性材料置于無菌條件下，用干燥、無菌氣流脫水4-8h，然后置于光照條件下，于無菌干燥瓶中繼續脫水培養1-2個月；所述無色透亮胚性材料逐漸形成內部中空的叢生體細胞胚胎；將所述內部中空的叢生體細胞胚胎接種于萌發培養基中，1-2個月后形成正常叢生芽；