[發明專利]檢測培養基中鈉、鉀離子濃度的方法

在審

• 申請號: 201710042840.8
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN108333262A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 王琨;馬錚;馬梵辛;黃璐
• 申請（專利權）人: 湖北生物醫藥產業技術研究院有限公司;人福醫藥集團股份公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明提出了一種檢測培養基中鈉、鉀離子濃度的方法，該方法包括：將培養基進行超濾截留處理；將超濾截留處理后產物進行高效液相色譜?蒸發光散色分析，以便獲得色譜圖；以及基于高效液相色譜?蒸發光散色分析結果，確定待測培養基中鈉、鉀離子的濃度。利用根據本發明實施例的檢測方法，鈉鉀分離度好，鈉、鉀離子定量限既滿足了樣品檢測的需求，又實現了對養基中鈉鉀離子濃度的高效、快速檢測，有效控制了檢測成本，適于工業生產的需求。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體的，本發明涉及檢測培養基中鈉、鉀離子濃度的方法。

背景技術

在生物制藥領域，無血清培養基被廣泛的應用于培養哺乳動物以制備單克隆抗體，疫苗和重組蛋白等。無血清培養基與含血清培養基比較具有獨特的優勢，具體體現在以下幾個方面：可避免血清批次間的質量變動，提高細胞培養和實驗結果的重復性；避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染；避免血清組分對實驗研究的影響；有利于體外培養細胞的分化；可提高產品的表達水平并使細胞產品易于純化。

采用無血清培養基進行工業化生產，細胞發酵條件對產品的質量有很大影響，其中培養基中的無機鹽有助于保持細胞的滲透平衡，通過提供鈉、鉀和鈣離子調節膜電位。

然而，如何快速檢測培養基中鈉、鉀離子的濃度，又能有效控制檢測成本，以適應工業生產的需求，是一線科研工作者拭待解決的問題。

發明內容

本申請是基于發明人對以下問題和事實的發現而提出的：

從現有技術來看，可以采用原子吸收光譜法檢測酵母發酵液中鈉鉀含量，原子吸收光譜法是基于氣態的基態原子外層電子對紫外光和可見光范圍的相對應院子共振輻射線的吸收強度來定量被測元素含量為基礎的分析方法，但本方法的局限性在于不能進行多元素分析，每一種元素需要配備不同光源，光源成本費用高，因測量精度高，需將樣品進行多個數量級稀釋，對大批量檢測不便；而在醫學檢測中，常使用酶法和離子選擇電極法測定鈉鉀離子的濃度，酶法測定鈉鉀原理為：β-半乳糖苷酶動力學法測定鈉，丙酮酸激酶動力學法測定鉀，常使用生化分析儀進行檢測，該法對儀器有一定要求，每次測定前要先定標通過后方可檢測，且檢測試劑昂貴；離子選擇電極法需要專用儀器和電極，且儀器泵管壽命短加上電極價格昂貴，培養基中成分是否對其造成干擾，還缺乏有效依據。

基于對現有技術問題的認識，本申請的發明人將高效液相色譜-蒸發光散射檢測技術成功應用到培養基中鈉鉀離子濃度的檢測中，實現了對養基中鈉鉀離子濃度的高效、快速檢測，有效控制了檢測成本，適于工業生產的需求。

在本發明的第一方面，本發明提出了一種檢測培養基中鈉、鉀離子濃度的方法。根據本發明的實施例，所述方法包括：將培養基進行超濾截留處理；將超濾截留處理后產物進行高效液相色譜-蒸發光散色分析，以便獲得色譜圖；以及基于高效液相色譜-蒸發光散色分析結果，確定待測培養基中鈉、鉀離子的濃度。利用根據本發明實施例的檢測方法，鈉鉀分離度好，鈉、鉀離子定量限既滿足了樣品檢測的需求，又實現了對養基中鈉鉀離子濃度的高效、快速檢測，有效控制了檢測成本，適于工業生產的需求。

根據本發明的實施例，所述檢測培養基中鈉、鉀離子濃度的方法還可以進一步具有如下附加技術特征至少之一：

根據本發明的實施例，所述超濾截留是通過如下方式進行的：1)將待測培養基進行第一離心處理；2)將第一離心處理后上清加入超濾管中，所述超濾管的截留量為30kD；3)將所述超濾管進行第二離心處理，以便獲得濾下液，所述第二離心處理是在轉速為7000rpm的條件下離心5min，所述濾下液為所述超濾截留處理后產物。發明人在實驗中發現，采用上述的超濾截留處理培養基，不僅可以有效去除待測培養基中細胞及其碎片，減少胞內金屬離子對檢測結果的影響，避免樣品中蛋白大分子物質堵塞色譜柱，又可以有效控制處理后樣品的酸性強度，減少樣品對陽離子色譜分離的影響，以控制平行處理樣品的信號差異。