[發明專利]一種嵌合IBDV中和表位的重組人3型腺病毒的制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710040877.7
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106754760A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 蔣再學;羅滿林;李春紅;唐滿華
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/861;A61K39/12;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標事務所有限責任公司45112
• 代理人: 楊雪梅

技術領域

本發明屬于重組病毒基因工程技術領域，具體涉及一種以重組人3型腺病毒為載體，嵌合傳染性法氏囊病毒（IBDV）中和表位的重組人3型腺病毒表位疫苗候選株及其制備方法和應用。

背景技術

傳染性法氏囊病（IBD）是由傳染性法氏囊病毒（IBDV）引起的雞和火雞的一種急性、高度接觸性傳染病，除直接引起雞死亡和生產性能下降外，還可導致感染雞免疫抑制。

反向遺傳技術的成功建立，很大程度上推進了IBDV的預防工作。眾多學者對于IBDV的A節段做了相關的研究，發現IBDV的VP2蛋白對病毒的毒力、細胞嗜性有重要作用，VP3和VP5蛋白也對病毒的復制有一定的影響，VP1對病毒的復制也有一定的影響。研究表明，IBDV VP2上存在2個線性中和抗原表位，其刺激機體后產生的抗體可以有效的中和IBDV感染雞胚。

由于IBDV對很多理化條件都有很強的抵抗力，對乙醚，氯仿，吐溫，胰蛋白酶都有抵抗力，對大多數消毒藥也有抵抗力，病毒很容易被攜帶和保存。

應用疫苗進行免疫接種是防控IBDV的最主要手段。通常是接種育種雞，這樣可以使剛出殼的雛雞獲得一定水平的母源抗體以抵御早期感染。用于育種雞免疫的通常采用滅活疫苗，但是該病毒的滅活后仍然存在一定的危害，且免疫效果沒有活苗好。使用弱毒活疫苗雖然提高了疫苗的保護力，但是其會收到母源抗體的干擾，而且通常還有一定殘存的毒力，存在毒力返強的危險，中等毒力活疫苗可以不受母源抗體干擾而產生較強的免疫應答，但由于其殘存的毒力，通常容易引起法氏囊組織損傷。

人3型腺病毒（HAdV3）疫苗可以作為經腸道黏膜免疫的載體使用，其六鄰體的高變區可以插入氨基酸的外源片段，這樣將具有免疫活性的抗原片段展示的人3型腺病毒粒子表面，隨著病毒的復制，含有抗原片段的重組子就會不斷復制，并且展示到人3型腺病毒的表面的抗原片段具有更好的免疫原性。

經檢索，未見用重組人3型腺病毒表位疫苗候選株用于傳染性法氏囊病預防的報導。

發明內容

本發明的目的是提供一種嵌合IBDV中和表位的重組人3型腺病毒的制備方法和應用，將IBDV的中和抗原表位嵌和到人3型腺病毒（HAdV3）病毒粒子表面，可獲得一種預防IBDV的表位疫苗候選株。

實現本發明目的的技術方案是：

一種嵌合IBDV中和表位的重組人3型腺病毒，所述人3型腺病毒六鄰體的HVR1區插入有IBDV的中和抗原表位VP2-1，VP2-1的氨基酸序列為CDSSDRPRVYTIT。

其中，所述IBDV的中和抗原表位VP2-1的替換氨基酸序列為HVR1區的NRDNAVTT。

本發明還提供一種人3型腺病毒-IBDV VP2-1的表位疫苗候選株，所述表位疫苗候選株含有上述的重組人3型腺病毒，該表位疫苗候選株可以誘導產生抗IBDV的免疫反應，利用該表位疫苗候選株可以制備預防IBDV的表位疫苗。

本發明還提供一種載體，所述載體包含上述的重組人3型腺病毒。

本發明還提供了制備上述嵌合IBDV中和表位的重組人3型腺病毒，包括如下步驟：在人3型腺病毒（HAdV3）的六鄰體的HVR1區插入IBDV的中和抗原表位VP2-1， VP2-1氨基酸序列為CDSSDRPRVYTIT，所替換的氨基酸序列為NRDNAVTT。

本發明嵌合IBDV中和表位的重組人3型腺病毒的應用，用于傳染性法氏囊病的預防。

本發明所提供的嵌合IBDV中和表位的重組人3型腺病毒，允許IBDV中和抗原表位個別氨基酸的缺失、替換或添加。但需要保持中和抗原表位的免疫原性；允許被置換的HVR1區個別氨基酸的缺失、替換或添加，但需要保持腺病毒的穩定性，同時保證外源表位的免疫活性。

本發明在人3型腺病毒六鄰體衣殼上展示IBDV的中和抗原表位，該重組腺病毒可以產生抗IBDV感染的免疫應答，多次免疫注射能加強免疫。該重組病毒可以預防IBDV感染。

具體實施方式

為使本發明容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明而不用于限制本發明的范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按照常規實驗方法進行。

本實施例中的Ad3使用的Hadv3病毒株(全基因Genbank號：DQ099432)。

1：構建重組病毒載體