[發(fā)明專利]一種鑒定嘎拉蘋果后代植株的SSR分子標(biāo)記III及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710040796.7
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106755482B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧舒;曹秋芬;侯麗媛;肖蓉;張春芬;李亞莉;聶園軍;王曉清;溫鑫;秦永軍
• 申請（專利權(quán)）人: 山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所;山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心;山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與經(jīng)濟(jì)研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 太原晉科知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 王瑞玲

1.一種鑒定嘎拉蘋果后代植株的SSR分子標(biāo)記III的應(yīng)用，其特征是包括以下步驟：

（1）以蘋果基因組DNA為PCR擴增模板，分別使用SSR分子標(biāo)記III的4對引物，進(jìn)行PCR擴增，反應(yīng)體系為15μL，其中含10×PCR Buffer 1.5 μL、2.5 mM dNTPs mixture 1.2μL、10ng/μL Primers F 1.5μL、10ng/μL Primers R 1.5μL、5U Taq 聚合酶0.15μL、100ng/μLDNA模板0.75 μL，去離子水補足至15μL；

（2）擴增程序為：94℃預(yù)變性2 min 30 s，94℃變性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸40s，35個循環(huán)，72℃10 min，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

（3）PCR產(chǎn)物檢測，用8%非變性聚丙烯酰胺電泳，將PCR的每個反應(yīng)產(chǎn)物加入1/2的非變性Loading Buffer，混勻，150V恒定電壓150min，冰醋酸固定，AgNO₃ 染色拍照；

（4）用于花藥培養(yǎng)植株鑒定時，待測蘋果能擴增出上述SSR分子標(biāo)記III的4對引物相對應(yīng)的單獨的一條特異性條帶，說明待測蘋果植株為純合材料，如出現(xiàn)兩條條帶，則待測蘋果植株不是純合材料；

所述SSR分子標(biāo)記III由LG4 標(biāo)記CH04e02、LG6 標(biāo)記C53、LG12 標(biāo)記CH01d09、LG14 標(biāo)記CH01g05組成，SSR分子標(biāo)記III的4對引物在檢測過程中同時使用，所述引物的序列為：

LG4 標(biāo)記CH04e02：

上游：5^，- GGCGATGACTACCAGGAAAA -3^，

下游：5^，- ATGTAGCCAAGCCAGCGTAT -3^，

LG6 標(biāo)記C53：

上游：5^，- GCCACTGTGGGTTGCTTTAT -3^，

下游：5^，- AAAACATGCTGCTGTTGGAA -3^，

LG12 標(biāo)記CH01d09：

上游：5^，- GCCATCTGAACAGAATGTGC -3^，

下游：5^，- CCCTTCATTCACATTTCCAG -3^，

LG14 標(biāo)記CH01g05：

上游：5^，- CATCAGTCTCTTGCACTGGAAA -3^，

下游：5^，- GACAGAGTAAGCTAGGGCTAGGG -3^，。