[發明專利]一種mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法

有效

• 申請號: 201710040058.2
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN108330182B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發明（設計）人: 李天忠;郝理;王勝男;王圣元;陳佳琪
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6848
• 分類號: C12Q1/6848;C12N15/82;C12N15/65
• 代理公司: 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙) 11392
• 代理人: 張新利

1.一種mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法，其特征在于，構建基因攜帶熒光蛋白標簽的載體，制備轉基因植物；以轉基因植物為砧木，將其和野生型接穗在無菌條件下進行微嫁接，觀察砧木和接穗的熒光出現情況，若砧木和接穗不定根均觀察到熒光，則說明所述基因的mRNA分子在植物砧穗間傳遞。

2.一種mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法，其特征在于，構建基因攜帶熒光蛋白標簽的載體，制備轉基因植物；以轉基因植物為砧木，將其和野生型接穗在無菌條件下進行微嫁接，采用巢氏PCR檢測，若砧穗巢氏PCR產物均出現特異性條帶，則說明所述基因的mRNA分子在植物砧穗間傳遞。

3.如權利要求1或2所述的熒光鑒定方法，其特征在于，所述熒光蛋白為綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、藍色熒光蛋白、橙色熒光蛋白或藍綠熒光蛋白。

4.如權利要求1或2所述的熒光鑒定方法，其特征在于，所述基因為杜梨HMGR1。

5.如權利要求4所述的熒光鑒定方法，其特征在于，所述載體為過表達GFP-PbHMGR1載體，其通過以下方法制備得到：提取杜梨基因組RNA，反轉錄為cDNA，進行PCR擴增，回收目的片段并純化，連接T載體，轉化感受態細胞，選擇測序正確的陽性克隆即得，所述PCR擴增所用的引物對的序列如SEQ ID NO.2-3所示。

6.如權利要求5所述的熒光鑒定方法，其特征在于，所述巢氏PCR，第一輪PCR反應采用的引物對序列如SEQ ID NO.4-5所示，第二輪PCR反應采用的引物對序列如SEQ ID NO.6-7所示。

7.一種HMGR1mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法，包括如下步驟：

(1)分別提取杜梨總RNA，反轉錄成cDNA，PCR擴增HMGR1基因的全長；

(2)構建杜梨HMGR1基因攜帶熒光蛋白標簽的載體，制備轉基因植物；

(3)轉基因植物為砧木，將其和野生型接穗在無菌條件下進行微嫁接，觀察砧木和接穗的熒光出現情況，若砧木和接穗不定根均觀察到熒光，則說明杜梨HMGR1基因的mRNA分子在植物砧穗間傳遞。

8.一種HMGR1mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法，包括如下步驟：

(1)分別提取杜梨總RNA，反轉錄成cDNA，PCR擴增HMGR1基因的全長；

(2)構建杜梨HMGR1基因攜帶熒光蛋白標簽的載體，制備轉基因植物；

(3)轉基因植物為砧木，將其和野生型接穗在無菌條件下進行微嫁接，采用巢氏PCR檢測，若砧穗巢氏PCR產物均出現長度為1084bp的特異性條帶，則說明HMGR1基因mRNA分子在植物砧穗間傳遞。

9.權利要求1-8任一所述的熒光鑒定方法在植物種質資源改良中的應用。

10.權利要求1-8任一所述的熒光鑒定方法在鑒定可在植物砧穗間遠距離傳遞mRNA分子的基因中的應用。