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[發明專利]一種mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法有效

專利信息
申請號: 201710040058.2 申請日: 2017-01-18
公開(公告)號: CN108330182B 公開(公告)日: 2020-04-10
發明(設計)人: 李天忠;郝理;王勝男;王圣元;陳佳琪 申請(專利權)人: 中國農業大學
主分類號: C12Q1/6848 分類號: C12Q1/6848;C12N15/82;C12N15/65
代理公司: 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙) 11392 代理人: 張新利
地址: 100193 *** 國省代碼: 北京;11
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 mrna 分子 植物 砧穗間 傳遞 熒光 鑒定 方法
【權利要求書】:

1.一種mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法,其特征在于,構建基因攜帶熒光蛋白標簽的載體,制備轉基因植物;以轉基因植物為砧木,將其和野生型接穗在無菌條件下進行微嫁接,觀察砧木和接穗的熒光出現情況,若砧木和接穗不定根均觀察到熒光,則說明所述基因的mRNA分子在植物砧穗間傳遞。

2.一種mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法,其特征在于,構建基因攜帶熒光蛋白標簽的載體,制備轉基因植物;以轉基因植物為砧木,將其和野生型接穗在無菌條件下進行微嫁接,采用巢氏PCR檢測,若砧穗巢氏PCR產物均出現特異性條帶,則說明所述基因的mRNA分子在植物砧穗間傳遞。

3.如權利要求1或2所述的熒光鑒定方法,其特征在于,所述熒光蛋白為綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、藍色熒光蛋白、橙色熒光蛋白或藍綠熒光蛋白。

4.如權利要求1或2所述的熒光鑒定方法,其特征在于,所述基因為杜梨HMGR1。

5.如權利要求4所述的熒光鑒定方法,其特征在于,所述載體為過表達GFP-PbHMGR1載體,其通過以下方法制備得到:提取杜梨基因組RNA,反轉錄為cDNA,進行PCR擴增,回收目的片段并純化,連接T載體,轉化感受態細胞,選擇測序正確的陽性克隆即得,所述PCR擴增所用的引物對的序列如SEQ ID NO.2-3所示。

6.如權利要求5所述的熒光鑒定方法,其特征在于,所述巢氏PCR,第一輪PCR反應采用的引物對序列如SEQ ID NO.4-5所示,第二輪PCR反應采用的引物對序列如SEQ ID NO.6-7所示。

7.一種HMGR1mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法,包括如下步驟:

(1)分別提取杜梨總RNA,反轉錄成cDNA,PCR擴增HMGR1基因的全長;

(2)構建杜梨HMGR1基因攜帶熒光蛋白標簽的載體,制備轉基因植物;

(3)轉基因植物為砧木,將其和野生型接穗在無菌條件下進行微嫁接,觀察砧木和接穗的熒光出現情況,若砧木和接穗不定根均觀察到熒光,則說明杜梨HMGR1基因的mRNA分子在植物砧穗間傳遞。

8.一種HMGR1mRNA分子在植物砧穗間傳遞的熒光鑒定方法,包括如下步驟:

(1)分別提取杜梨總RNA,反轉錄成cDNA,PCR擴增HMGR1基因的全長;

(2)構建杜梨HMGR1基因攜帶熒光蛋白標簽的載體,制備轉基因植物;

(3)轉基因植物為砧木,將其和野生型接穗在無菌條件下進行微嫁接,采用巢氏PCR檢測,若砧穗巢氏PCR產物均出現長度為1084bp的特異性條帶,則說明HMGR1基因mRNA分子在植物砧穗間傳遞。

9.權利要求1-8任一所述的熒光鑒定方法在植物種質資源改良中的應用。

10.權利要求1-8任一所述的熒光鑒定方法在鑒定可在植物砧穗間遠距離傳遞mRNA分子的基因中的應用。

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