[發明專利]一種利用抑菌培養基培育茶樹的組培方法

在審

• 申請號: 201710040001.2
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN106857249A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 葉乃興;林慶良;金珊;楊國一;謝微微;葉卓昕;許子霄;屈艷勤
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州市眾韜專利代理事務所(普通合伙)35220
• 代理人: 陳智雄,黃秀婷

技術領域

本發明涉及一種植物組織培養方法，具體涉及一種利用抑菌培養基培育茶樹的組培方法，屬生物技術領域。

背景技術

茶樹(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)屬山茶科山茶屬多年生常綠木本植物，茶葉是世界上三大無酒精飲料之一。近年來，隨著茶產業的不斷發展，茶葉生產中對優良茶樹新品種的需求越來越迫切。利用生物技術進行組培快繁具有繁殖系數高，最大限度地保持品種的遺傳穩定性和無性系快繁能力等優點，在茶葉生產中具有廣闊的應用前景,

雖然傳統育種方法已培育出了產量高和品質優的茶樹品種，但生產上仍缺乏高茶氨酸、高茶多酚和低咖啡堿等符合人們消費需求的優異品種。這主要是因為茶樹基因的高度雜合性，傳統的茶樹育種年限長、難度較大。植物離體再生技術的日益成熟和基因工程技術的不斷發展，為茶樹品種創新開辟了新的途徑?；蚬こ碳夹g的應用需要建立高頻率的遺傳轉化體系，而高頻率的遺傳轉化體系又依賴于高頻率的再生體系。

茶樹組織培養的成本主要包括組培苗生產所需的培養基、設施設備、供電成本、耗材和人工成本。常規的茉莉花組織培養方法要求外植體接種在高溫高壓滅菌后的無菌培養基中才能正常生長，耗能大，人工操作成本高。如果能通過藥物抑菌的方法來改造培養基，使培養基在不需要進行高溫高壓滅菌，就能夠獲得茶樹的正常生長。然而，針對不同的植物品種要想找到一種合適的抗菌劑是比較困難的，往往是當培養基抗菌時，植物組織的生長就受到抑制；而植物組織正常生長，就無法獲得滿意的抗菌效果。其原因一是還沒有一種抗生素對所有的菌類都有效，而且藥效期短；二是有些抗菌素、防腐劑在有效的濃度下，其殺菌、抗菌離子對植物組織直接產生傷害，有些則產生鹽害。必須選擇與植物組織親和、友好，藥效期長(至少一個生長周期)，不產生鹽害并具有殺菌、抗菌活性的物質作為抗菌劑。因此，篩選合適的抗菌藥劑是開放組培技術得以應用的關鍵。

本發明為茶樹組織培養提供一種抑菌培養方法。一方面可以降低茶樹組織培養對設施設備的要求，尤其不需要高溫高壓滅菌所需配置的高壓鍋設備，縮減了投資成本，電能消耗也將大幅度降低；另一方面，采用抑菌培養基進行茶樹組織培養，組培環節大為簡化，人工操作的速度大幅提高，從而降低了人工成本。此外，由于改造后的培養基自身具有殺菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制組織培養過程中的污染問題，又不會對茶樹生長產生毒害或抑制，即不影響茶樹的正常生長，從根本上簡化了茶樹組織培養。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用抑菌培養基培育茶樹的組培方法。

本發明的目的是通過以下方法實現的。

本發明的一種利用抑菌培養基培育茶樹的組培方法，包括培養容器消毒、培養基配制、無菌水制備、誘導培養、增殖培養、生根培養和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培養容器消毒：將培養瓶、瓶蓋及接種用的塑料盤在100mg/L次氯酸鈉+10mg/L環絲氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸鈉的水溶液中浸泡不少于10h，保存備用；

2.培養基配制：誘導培養基為：MS+1～3mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L IBA+40～100mg/L次氯酸鈉+5～10mg/L乳酸鏈球菌素+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；增殖培養基為：MS+1～2mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L IBA+0.5～2mg/L GA3+40～100mg/L次氯酸鈉+5～10mg/L乳酸鏈球菌素+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；生根培養基為：1/2MS+1～3mg/L IBA+40～100mg/L次氯酸鈉+5～10mg/L乳酸鏈球菌素+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；所述MS，為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養基；所述6-BA，指6-芐氨基嘌呤；所述IBA，指α-吲哚丁酸；所述GA3，指赤霉素；配制培養基時，先稱各培養基配方中的蔗糖和瓊脂粉，加培養基總重量1/2的自來水，加熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養基配方配齊其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調pH值至5.8，分裝到消毒過的培養容器中，封口，冷卻凝固后備用；